AMAMFSIs0228  干奶  乳酸  乳酸盐  酶法

AM-AM-FS-Is-0228

干奶——乳酸和乳酸盐含量的测定——酶法

1.适用范围：

本标准采用酶法，测定各类干奶中乳酸和乳酸盐含量。

2.原理概要：

用温水溶解干奶，沉淀出脂肪和蛋白质，然后过滤。用下列酶或生化物质处理滤液，同时加入，但作用次序如下：

－L-乳酸脱氢酶(L-LDH)和D-乳酸脱氢酶(D-LDH)，在烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在下，把乳酸盐氧化为丙酮酸盐，同时NAD转化为其还原态(NADH);

－谷氨酸盐丙酮酸盐转氨酶(GPT)，在L-谷氨酸盐存在下，把丙酮酸盐转化为L-丙胺酸，同时L-谷氨酸盐转化为α-酮戊二酸盐。

在波长340nm处进行光谱测量，测定产生的NADH量，它与乳酸和乳酸盐含量成比例。

3.主要仪器和试剂：

3.1 仪器

常规实验室仪器，主要有：分析天平、玻璃烧杯(50ml)、量筒(50ml)、容量瓶(100ml)、移液管(0.02,0.05,0.2,1,和2ml)、带刻度的移液管(5和10ml,分度为0.1ml)、玻璃过滤漏斗(直径约7cm)、滤纸、玻璃棒、塑料搅棒、光谱仪。

3.2 主要试剂

所有试剂应为分析纯。用于制备酶溶液的水至少应为二次玻璃蒸馏纯度的水，其他用水应为玻璃蒸馏水或至少同等纯度的水。主要试剂有：六氰铁(II)酸钾[k₄Fe(CN)₆]溶液、硫酸锌溶液、氢氧化钠溶液(0.1mol/l)、缓冲溶液(pH10)、NAD溶液、L-LDH溶液、D-LDH溶液、GPT溶液、L-乳酸锂溶液、D-乳酸锂溶液。

4.过程简述：

4.1 样品制备

取样见ISO 707。试样在储存时应避免组分被破坏或发生改变。

4.2测试

先进行试剂活性确认试验。

把试样移至带盖容器中，其量应能确保进行两次试验。立即盖好容器盖子，通过摇荡使试样混合均匀。制样时，应尽可能快以避免试样暴露在大气中，降低水的吸收。

称取约1g试样，精确至1mg,放入玻璃烧杯中。加入20ml温水(40～50℃)，用玻璃棒搅拌，使试样溶解。溶液及淋洗液全部移至100ml容量瓶中。冷却至约20℃。按顺序向溶液中加入5.0ml六氰铁(II)酸钾溶液、5.0ml硫酸锌溶液和10ml氢氧化钠溶液，混匀，用水稀释至100ml，混匀后静置30min。然后过滤。

移取1.0ml滤液于光谱池中，加入1.0ml缓冲溶液、0.20mlNAD溶液、0.02ml GPT悬浮液，用塑料棒使之混匀。5分钟后在340nm处测定其相对水的光谱吸收。

向光谱池中加入0.02ml L-LDH和0.05ml D-LDH悬浮液，再次混匀，45分钟和60分钟后，再测定其相对水的光谱吸收。

5.精确度：

重复性：相同试验者使用相同设备在短时间间隔内，采用相同试验方法对理想的试验材料进行分析，得到的两个独立的实验结果的相对偏差：

对无脂肪固体，乳酸和乳酸盐含量达到包括60mg/100g，不超过10mg/100g；

对无脂肪固体，乳酸和乳酸盐含量超过60mg/100g，不超过算术平均值的15%。

再现性：不同试验者使用不同设备，采用相同试验方法对理想的试验材料进行分析，得到的两个独立的实验结果的相对偏差：

对无脂肪固体，乳酸和乳酸盐含量达到包括100mg/100g，不超过15mg/100g。

算术平均值的20% 无脂肪固体，乳酸和乳酸盐含量超过100mg/100g。

6.来源：

国际标准化组织，ISO 8069：1986(E)