*CN102286063A*
(10)申请公布号 CN 102286063 A(43)申请公布日 2011.12.21
(12)发明专利申请
(21)申请号 201110187744.5(22)申请日 2011.07.06
(71)申请人南京泽朗医药科技有限公司
地址210046 江苏省南京市栖霞区尧化街道
甘家边108号05幢6楼(72)发明人刘东锋 郭琴(51)Int.Cl.
C07J 71/00(2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 4 页
(54)发明名称
一种延龄草苷的制备方法(57)摘要
本发明涉及一种延龄草苷的制备方法，延龄草经乙醇提取后，采用石油醚脱脂处理，脱脂后的药液经氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀用丙酮洗涤，再采用高速逆流色谱法进行分离纯化，流出物浓缩、低温干燥即得产品。本发明具有工艺操作简单、提取率高、产品纯度高的特点。
CN 102286063 ACN 102286063 ACN 102286073 A
权 利 要 求 书
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1.一种延龄草苷的制备方法，其特征在于所述的方法包括下列步骤：取延龄草根茎，加入4-10倍量体积的醇溶液温浸2-8小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，脱脂后的药液加入氧化铝柱层析，乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀用丙酮洗涤，再采用高速逆流色谱法进行分离纯化，流出物浓缩、低温干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述延龄草苷的制备方法，其特征在于所述温浸温度60-85℃。3.根据权利要求1所述延龄草苷的制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱溶剂系统为正庚烷-乙酸乙酯-乙腈，其体积比为（3-7）（1-3）：（2-4）：。
4.根据权利要求1所述延龄草苷的制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，其体积比为（4-8）（3-5）：（4-7）：（3-6）：。
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说 明 书
一种延龄草苷的制备方法
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技术领域
[0001]
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种延龄草苷的制备方法。
背景技术
[0002]
延龄草苷（Trillin），异名：Diosgenin glucoside，分子式：C33H52O8；分子量：576.7658，CAS登录号：14144-06-0，分子结构式如下：
延龄草苷是为天然化合物，是一种甾体皂苷，具有降血脂、抗凝、抗自由基活性等作用，来源于百合科植物Trillium tschonoskii Maxim的根茎，也有文献从穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Mak.）等植物中分离得到延龄草苷。[0003] 中药延龄草为传统的名贵中药，又名头顶一颗珠，含有多种甾体皂苷，黄酮和萜类成分。具有镇静安神、祛风活血、延年益寿的功效。主治头晕目眩、失眠、跌打损伤、外伤出血、神经衰弱、高血压、脑震荡后遗症等疾病等。黄丽亚等研究表明头顶一颗珠抗衰老作用与增强脑组织SOD、GSH-Px活性，减少MDA蓄积有关。也有文献发现头顶一颗珠能明显提高缺血-再灌注损伤后的左心功能，可提高血中SOD和GSH-Px活性，降低MDA的含量。[0004] 现有技术中，延龄草苷的提取方法主要是用60%-70%乙醇回流提取，纯化方法主要采用硅胶柱、ODS中低压柱层析及半制备高效液相色谱等，但这些提取纯化方法得到的延龄草苷含量低，生产周期长、成本高，且不利大生产操作。发明内容
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种利于大生产操作、提取率高、产品纯度高的延龄草苷的制备方法。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：
取延龄草根茎，加入4-10倍量体积的醇溶液温浸2-8小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，脱脂后的药液加入氧化铝柱层析，乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀用丙酮洗涤，再采用高速逆流色谱法进行分离纯化，流出物浓缩、低温干燥即得产品。[0007] 所述温浸温度60-85℃。
[0008] 所述高速逆流色谱溶剂系统为正庚烷-乙酸乙酯-乙腈，其体积比为（3-7）：（1-3）（2-4）：。
[0009] 所述高速逆流色谱溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水，其体积比为（4-8）：
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说 明 书
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（3-5）（4-7）：（3-6）：。
[0010] 采用上述技术方案制备延龄草苷，操作简单、提取率高、样品损失少、产品纯度高，利于大生产操作。
[0011] 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不仅限于下列实施方式。
具体实施方式
[0012] 实施例1：
取延龄草2kg，加入其重量6倍量体积的65%乙醇加热至80℃，温浸4小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按体积比7:3:4置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.7%。
[0013] 实施例2：
取延龄草2kg，加入其重量4倍量体积的65%乙醇加热至80℃，温浸2小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按体积比5:2:3置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以2ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.4%。
[0014] 实施例3：
取延龄草2kg，加入其重量5倍量体积的70%乙醇加热至80℃，温浸8小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按体积比3:2:2置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.5%。
[0015] 实施例4：
取延龄草2kg，加入其重量6倍量体积的65%乙醇加热至80℃，温浸5小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取正庚烷、乙酸乙酯、乙腈按体积比4:1:4置于分液漏斗中混合
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均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为850rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.1%。
[0016] 实施例5：
取延龄草2kg，加入其重量5倍量体积的65%乙醇加热至80℃，温浸3小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比4:4:5:3置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为850rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.3%。[0017] 实施例6：
取延龄草3kg，加入其重量8倍量体积的70%乙醇加热至80℃，温浸4小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比8:3:4:6置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以2ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.8%。[0018] 实施例7：
取延龄草5kg，加入其重量4倍量体积的70%乙醇加热至80℃，温浸7小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比5:5:7:4置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC测定，纯度为98.4%。实施例8：
取延龄草5kg，加入其重量7倍量体积的65%乙醇加热至80℃，温浸6小时，滤过，取滤液减压回收乙醇，加入等体积石油醚脱脂，将脱脂后的药液加入中性氧化铝柱层析，用乙醚-乙醇（65:35）洗脱，收集洗脱液，浓缩，加丙酮析出黄色沉淀，离心，沉淀再用丙酮洗涤，低温干燥得延龄草苷粗品。取石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水按体积比7:4:6:5置于分液漏斗中混合均匀，静置分层，分离上下相，以上相为固定相，下相为流动相，取上述延龄草苷粗品150mg溶于10ml下相中待用，开启高速逆流色谱仪，以3ml/min流速泵入流动相，待平衡后开始连续进样，转速为900rpm，收集延龄草苷流分，浓缩，低温干燥即得延龄草苷，经HPLC
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