菠菜色素的提取与分离

维普资讯 http://www.cqvip.com 第３卷第３期　２００４年９月　太原师范学院学报（自然科学版）　Ｊ０ＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＴＡＩＹＵＡＮ　ＴＥＡＣＨＥＲＳ　ＣＯＬＬＥＧＥ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）　Ｖｏ１．３　Ｎｏ．３　Ｓｅｐｔ．　２００４　菠菜色素的提取与分离　李好样冯轶雪　（太原师范学院化学系，山西太原０３０００１）　［摘要］　用抽滤和浸泡法从菠菜叶中提取了色素，使用薄层色谱、柱色谱对叶绿素、胡萝卜素　和叶黄素进行了分离．对比分析结果表明，用石油醚一乙醇（３：２）浸泡法提取效果较好，洗脱剂的选　择是菠菜色素分离的优化条４４－．　［关键词］　叶绿素；石油醚；菠菜色素　［文章编号］　１６７２—２０２７（２００４）０３—００６４—０３　［中图分类号］　Ｏ６２　［文献标识码］　Ａ　菠菜叶中含有叶绿素、胡萝ｂ素、和叶黄素等多种天然色素．叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化　剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等中，添加于胶姆糖中还可消除口臭．胡萝ｂ素的三种异构体　中Ｊ３一异构体具有维生素Ａ的生理活性，可代替维生素Ａ使用，也可作为食品工业中的色素使用，最新研究报　道，Ｊ３一胡萝ｂ素还有防癌功能．叶黄素是胡萝ｂ素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用．由此可　见，叶绿素等天然色素有广泛的用途，对于色素的提取与分离就显得很重要了．本文主要报道了用非极性溶　剂对菠菜色素的提取与分离，并找到了最佳的提取与分离方法．　１　实验部分　１．１仪器与试剂　仪器：布氏漏斗、研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱（２０×１０　ＣＩＴＩ）、滴液漏斗ＵＶ一１１００紫外分　光光度计．　试剂：石油醚（６０。Ｃ～９０　Ｃ）、甲醇（４ｇ学纯）、乙醇（９５　）、菠菜叶、丙酮（４ｇ学纯）、苯（４ｇ学纯）、乙酸乙酯　（４ｇ学纯）、无水硫酸钠、硅胶Ｇ、中性氧化铝（１５０目～１６０目）　１．２提取与分离　１．２．１抽、滤法提取菠菜色素＿１　取１５　ｇ洗净且用滤纸吸干的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎并与２０　ｍＬ甲醇拌匀，在研钵中研磨约５　ｍｉｎ，然　后用布氏漏斗轻微抽滤，弃去滤液．将菠菜汁放回研钵，适当研磨，用１５　ｍＬ石油醚一甲醇混合液（体积比为３　：２）萃取，轻微抽滤，重复三次，将每次的提取液用滴管转移到分液漏斗，然后用１０　ｍＬ水洗涤两次，以除去　萃取液中的甲醇（洗涤时轻轻振荡，以防止乳化），弃去水一甲醇层．石油醚层用无水硫酸钠干燥后倾至圆底烧　瓶，在水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为１　ｍ　Ｌ．　１．２．２浸泡法提取菠菜色素　在研钵中放入１０　ｇ新鲜的菠菜叶，加入１５　ｍＬ３：２（体积比）石油醚一乙醇混合液，适当研磨（不要研成　糊状，否则会给分离造成困难），将提取液用滴管转移到分液漏斗中．反复三次，合并提取液．向提取液中加入　ｌ０　ｍＬ饱和ＮａＣ１溶液（防止乳化）除去水溶性物质，弃去水层，再用蒸馏水洗涤两次．将有机层转入干燥的小　锥形瓶中，加２　ｇ无水硫酸钠干燥，干燥后的液体倾至另一锥形瓶中，在水浴上蒸发浓缩至大约ｌ　ｍ　Ｌ．　１．２．３薄层色谱分离菠菜色素　称取３　ｇ硅胶Ｇ加８　ｍＬ蒸馏水，立即充分研磨调成均匀糊状，制板，晾干后在ｌ１０　Ｃ活化１　ｈ，点样，用　不同的展开剂展开．　收稿日期：２００３—０４—１９　作者简介：李好样（１９６５一），女，太原师范学院化学系副教授，主要从事有机化学的教学工作和科研工作　维普资讯 http://www.cqvip.com 第３期　李好样等：菠菜色素的提取与分离　６５　１．２．４柱色谱分离菠菜色素ｌ＿２］　按参考文献Ｅ２］的方法进行，待色素全部进入柱体后，在柱顶小心加１．５　ｃｍ高度的洗脱剂一９：１（体积　比）石油醚一丙酮，然后在层析柱上面装一滴液漏斗，内装１５　ｍＬ洗脱剂，打开上下两个活塞，让洗脱剂逐滴　放出，层析即开始进行，用锥型瓶收集．当第一个有色圈（橙黄色）将滴出时，取另一锥形瓶收集，它就是胡萝　ｂ素，约用洗脱剂４０　ｍＬ．用７：３（体积比）石油醚一丙酮作洗脱剂，绿色圈下端呈黄色，再加２０　ｍＬ洗脱剂　洗脱，颜色分层更明显，但速度很慢，总共用去洗脱剂约１００　ｍ　Ｌ．分出第二个黄色带，它是叶黄素．再用３：１　：１（体积比）丁醇一乙醇一水作洗脱剂，洗脱叶绿素，速度很快，用洗脱剂约６０　ｍＬ　１．３紫外光谱测定　１．３．１胡萝ｂ素的紫外光谱测定．　用石油醚稀释所得的橙黄色试样，加到１　ｃｍ的比色皿中，以石油醚作空白试剂，测得入　为４７６　ｎｍ，４４８　ｎｍ，其吸光度分别为０．４９５，０．５７９．　１．３．２叶绿素的紫外光谱测定　用石油醚稀释所得的绿色试样，加到１　ｃｒｎ的比色皿中，以石油醚作空白试剂，测得入　为６６０　ｎｍ，４２６　ｎｍ，其吸光度分别为０．２３８，０．３４４．　２结果与讨论　２．１　提取　在提取色素的过程中，由于抽滤时不好控制，非极性溶剂难免会被抽去，且在几次转移中损失较多，程序　繁杂．用浸泡法操作简便易行，损失少，产率高．由于甲醇与乙醇的极性相近，但是乙醇易得、无毒，所以用　３：２的石油醚一乙醇通过浸泡的方法提取菠菜色素为此实验的优化条件．　２．２分离　薄层色谱是一种很好的分离、纯化、鉴定有机化合物的重要方法之一，尤其是对于微量分析，根据展开剂　不同，可以确定各色素的极性强弱，其比移值如表１所示．　表１菠菜色素的比移值（Ｒｆ）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　Ｒｆ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｃｈ　ｐｉｇｍｅｎｔ　展开剂　体积比　胡萝卜素　叶绿素　叶黄素　石油醚一丙酮　８：２　Ｏ．８２　０．２７　Ｏ．４４　石油醚一丙酮　９：１　０．８４　０．２３　ａ一０．４４　石油醚一丙酮　７：３　０．８８　０．５５　ｂ一０．３６　石油醚一乙酸乙酯　６：４　０．９６　０．７８　０．８５　ａ一０．４２　石油醚一乙酸乙酯　０．６１　ｂ一０．３３　石油醚一丙酮一苯　２：１：２　０．９０　０．６４　０．７６　苯一丙酮　８：２　０．８９　０．５Ｏ　０．７１　注：ａ、ｂ分别为叶绿素ａ和ｂ的比移值　由表１可以看出，菠菜色素中各种色素的比移值Ｒｆ大小为：胡萝ｂ素＞叶黄素＞叶绿素，按此顺序它们　的非极性依次减弱．薄层色谱分离的灵敏度不但很高，而且同时为柱层色谱法洗脱剂的选择提供了很好的参　考价值．　柱层色谱分离的关键是洗脱剂的选择，而洗脱剂的选择根据化合物的极性而定，胡箩ｂ素极性最小，因　此胡萝ｂ素的洗脱剂用极性较小的９：ｌ的石油醚一丙酮溶剂效果较好．但用９：１石油醚一丙酮为洗脱剂　时，叶黄素Ｒｆ＝０．２３偏小，为了提高叶黄素的分离效果，加大了洗脱剂的极性，选用了几种不同的洗脱剂，比　较如表２所示．　维普资讯 http://www.cqvip.com ６６　太原师范学院学报（自然科学版）　表２不同洗脱剂对叶黄素的洗脱效果比较　Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｗａｓｈｉｎｇ　ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｗａｓｈｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　第３卷　由表２可见，７：３石油醚一乙酸乙酯的使用为分离叶黄素的优化条件．分离出胡箩卜素和叶黄素后，可　加大溶剂极性以较快速度洗脱叶绿素．经大量实验确认当用３：１：１的丁醇一乙醇一水洗脱剂洗脱叶绿素　时，速度很快，效果又佳．　比较两种分离方法，薄层色谱分离效率高、灵敏度高、快捷，适用于微量分析，而柱色谱分离得不是很彻　底，但适用于较多量样品分离．　２．３紫外光谱测定　胡萝卜素的参考数据为４８１（１２３０２７），４５３（１４１２５４），实验所测数据与此有差距，可能是系统误差所导　致．叶绿素的紫外光谱数据没有查到，本次所得数据只能作为以后考证的参考数据．　３　结束语　综上所述，本文报道的用３：２的石油醚一乙醇通过浸泡法提取菠菜色素是在原有方法上的条件改进．　柱色谱，用９：１石油醚一丙酮洗脱胡箩卜素，７：３石油醚洗脱叶黄素，３：１：１丁醇一乙醇一水洗脱叶绿素　是菠菜色素分离的优化条件．　参考文献：　［１］兰州大学、复旦大学化学系有机化学教研室．有机化学实验（第２版）Ｉ－Ｍ３．北京：高等教育出版社，１９９４　［２］王福来．有机化学实验［Ｍ］．武汉：武汉大学出版社，２００１　Ａｂｓｔｒａｃｔ　ａｎｄ　Ｓｅｐａｒａｔｅ　ｏｆ　Ｓｐｉｎａｃｈ　Ｐｉｇｍｅｎｔ　Ｌｉ　Ｈａｏｙａｎｇ　Ｆｅｎｇ　Ｙｉｘｕｅ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔａｉｙｕａｎ　Ｔｅａｃｈｅｒｓ　Ｃｏｌｌｏｇｅ，Ｔａｉｙｕａｎ　０３００１２，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｉｍｍｅｒｓｉｏｎ，ｐｉｇｍｅｎｔ　ｗａｓ　ａｂｓｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｃｈ．Ｔｈｅ　ｃｈｏｒｏｐｈｙｌｌ　ｃａｒｏｔｅｎｅ　ａｎｄ　ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＴＬＣ　ａｎｄ　Ｃｏｌｕｍｎ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｉｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ—ｅｔｈａｎｏｌ（３：２）ｉｍｍｅｒｓｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗａｓｈｉｎｇ　ａｇｅｎｔ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｋｅｙ　ｏｆ　ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｉｇｍｅｎｔ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ３　ｃｈｏｒｏｐｈｙｌｌ；ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ；ｓｐｉｎａｃｈ　ｐｉｇｍｅｎｔ