紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量

中国民族民间医药　・药物研究　Ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｓｔｕｄｙ　１６・　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ　紫外分光光度法测定保健食品中总黄酮的含量　　白文莉　董丽荣　杨晓梅　李宗顺。１．昆明市食品药品检验所，云南昆明６５００３２；２．　云南省玉溪市食品药品检验所，云南玉溪６５３１００　【摘要】　目的：建立保健食品中总黄酮的含量测定方法。方法：以芦丁为对照品，以３０％乙醇为溶剂，测定吸光度值。结果：芦　丁对照品在２—３０　ｇ／ｍｌ浓度范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系，ｒ＝１，平均加样回收率为９６．６５％，ＲＳＤ％为２．０％。结论：本法　准确、快速、简便、环保，为测定保健食品中总黄酮的含量测定方法提供了参考。　【关键词】　保健食品；总黄酮；含量测定；紫外分光光度法　【中图分类号】Ｒ２８６　【文献标志码】Ａ　【文章编号】１００７—８５１７（２０１４）０７—００１６一Ｏ２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａＩ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｈｅａｌｔｈ—ｃａｒｅ　ｆｏｏｄ　ｂｙ　ＵＶ　ｍｅｔｈｏｄ　Ｄｏｎｇ　Ｌｉｒｏｎｇ　Ｙａｎｇ　Ｘｉａｏｍｅｉ　Ｌｉ　Ｚｏｎｇｓｈｕｎ　Ｂａｉ　Ｗｅｎｇｌｉ　１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒａｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｋｕｎｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ，６５００３２；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｙｕｘｉ，Ｙｕｎｎａｎ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ，６５３１００　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：ｔｏ　ｓｅｔ　ｕｐ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈ—ｃａｒｅ　ｆｏｏｄ　ｂｙ　ｕＶ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ　ａｂ—　ＳＯｒｂａｎｃｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　３０％ＥＴＯＨ．Ｒｕｔｉｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｂｓｔａｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｎ—　ｇｅｓ　ｏｆ　２～３０　ｇ．　一１　ｆ０ｒ　Ｒｕｔｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ａｂｓｔａｎｃｅ（ｒ＝１），ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９６．６５％，ＲＳＤ　ｗａｓ　２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａｎ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｌｙ，ｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｈｅａｌｔｈ—ｃａｒｅ　ｆｏｏｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｈｅａｌｔｈ—ｃａｒｅ　ｆｏｏｄ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＵＶ　ｍｅｔｈｏｄ　近年来，随着自由基生命科学的进展，黄酮类化合物　不仅是一种活性物质，还是重要的营养物质，其药理和营　养性都得到了国内外的广泛深人研究和临床试验…。作为　一表１对照品溶液过滤前后吸光度变化情况　种新运用的营养素，黄酮类化合物对人体具有重要的生　理保健功效，并体现出了如下功能：消除疲劳、保护血管、　２．３线性关系的考察　防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其　它脏器细胞、抗脂肪氧化、抗衰老等　。Ｊ。目前市场上有较　２．３．１储备液的制备精密称定芦丁对照品为１０．８ｍｇ，置　分别精密吸取“２．３．１项”储备　于２００ｍｌ量瓶中，加入３０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。　２．３．２标准曲线的建立液０．４、１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０　ｍｌ于１０　ｍｌ量瓶　多以黄酮类为功效成分的保健食品，总黄酮也多作为主要　的质量控制指标。　１仪器与试剂　中，加入３０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取３０％乙醇　为空白对照，在３６０　ｎｍ波长处测定吸光度，以吸光度Ａ值　与浓度Ｃ值线性回归，得曲线方程为：Ｃ＝３２．０７８Ａ＋　０．００３，ｒ＝１。结果表明，芦丁在２～３０ｔｘｇ／ｍｌ浓度范围内，　ＵＶ一２６０型紫外可见分光光度计（日本岛津）；ＡＥＬ一　２００型电子天平（日本岛津）；ＢＰ２１１Ｄ—ＯＣＥ型电子天平　（德国赛多利斯）。　芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：１００８０　—呈良好的线性关系。　２．３．３精密度试验２．３．４稳定性考察取同一浓度芦丁对照品溶液，连续测　取纽斯葆牌葛维片（批号为ＢＥ２６３一　定６次，测定吸光度，ＲＳＤ％为０．１％。　Ａ）１４片，去包衣，研细，取约０．５　ｇ，精密称定，置具塞　取芦丁对照品溶液（１５　ｇ／ｍ１）　锥形瓶中，精密加入３０％乙醇１００　ｍｌ，密塞，称定重量，　２００７０７；含量以９２．５％计）；无水乙醇（分析纯，利安　隆博华医药化学有限公司）。　２方法与结果　２．１检测波长的选择　在２００～６００　ｎｍ波长内扫描，结果表明：在３６０ｎｍ处，对　照品溶液有最大吸收峰，故测定波长选择３６０　ｎｍ。取“２．２　项”下样品溶液在２００—６００　ｎｍ波长内扫描，结果表明：　在３６０　ｎｍ处有最大吸收峰。　超声处理（功率２５０　Ｗ，频率４０　ＫＨＺ）３０分钟，放冷，用　３０％乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过０．４５　ｍ微　孔滤膜，即得。分别于０、２、４、８、１２、２４ｈ用紫外一可　见分光光度计测定其吸收度（３６０ｎｍ），测定结果ＲＳＤ为　０．７％，结果表明样品溶液在２４ｈ内稳定。　２．２样品溶液的制备取样品约０．５ｇ，精密称定，置具塞　２．３．５重复性考察取纽斯葆牌葛维片（批号为ＢＥ２６３一　锥形瓶中，精密加入３０％乙醇ｌＯＯｍｌ，密塞，称定重量，摇　Ａ）２０片，去包衣，研细，精密称取６份，每份约０．５　ｇ，　样品处理方法同“２．３．４项”，分别测定其吸收度，测定结　果ＲＳＤ为１．２％，结果表明，样品重复性良好。　匀，超声处理（功率２５０　Ｗ，频率４０　ＫＨＺ）３０分钟，放冷，　用３０％乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，过０．４５Ｉ￣ｍ　微孔滤膜，即得。试验表明微孔滤膜过滤能除去样品杂质，　２．３．６回收率试验　精密称取纽斯葆牌葛维片（批号为　ＢＥ２６３一Ａ）粉末９份，每份约０．２５　ｇ，分别精密加入适量　的芦丁对照品溶液，按照“２．２．４项”操作，分别测定吸　而对指标性成分没有影响（对照品溶液０．４５ｔｘｍ微孔滤膜过　滤后在３６０ｎｍ吸光度无明显变化）。结果见表１。　作者简介：董丽荣，主管药师。　药物研究　Ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｓｔｕｄｙ　中国民族民间医药　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｅｉｎｅ　ａｎｄ　ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｅｙ　・１７・　光度，计算回收率，结果见表２。　表２加样回收率测定结果　２．４样品含量测定结果３讨论　取１７批市售含黄酮的样品，按　上述方法测定，结果见表３。　保健食品中总黄酮的含量测定检验方法多采用聚酰胺　小柱脱色除杂质，试验操作表明精密度难以控制，且试验　中用到强致癌物苯作洗脱极　Ｊ，不利于环境保护和操作者　身体健康。本实验样品提取采用３０％乙醇为溶剂　Ｊ，回收　率试验表明样品提取完全，且不使用苯、甲醇等具有毒性　的有机溶剂，更环保和健康。　样品超声提取，经０．４５　ｍ微孔滤膜过滤，直接测定，　快速、简便、精密度良好，对照品溶液经微孔滤膜过滤前　表３样品测定结果　样品名称　批号　含量（ｍｇ／ｇ）　７．２２５９　１．４８００　后，吸收度不变，表明过滤前后指标成分没有损失。样品　溶液过滤前后吸收度有明显变化，表明经微孔滤膜过滤，　使样品更纯净，假阳性干扰减小，与上聚酰胺小柱除杂质　效果相同，而精密度明显优于上柱。　参考文献　国珍牌松花伴侣片　九巴乐含片　怡眠牌三七胶囊　２０１ｌ一０９—１０　３　１　１０１０５　２０１　１０６０１　３．６６５０　２．４６５７　２．４７０９　１．１１７３　轻松牌舒解片　纽斯葆牌葛维片　一Ａ９７０３０１　ＢＥ２６３一Ａ　１　１０９１０２３　［１］龚盛昭．黄酮类化合物保健食品大有开发价值［Ｊ］．广州食品工业科　技，１８（１）：６３—６４．　德惠牌绞股蓝泽泻茶　［２］谭秦丽，刘冬，李玉宝，等．总黄酮化合物药理研究进展［Ｊ］．安徽中　医学院学报，２００９，２８（３）：６２—６４．　［３］田永利，刘志宗，葛林，等．总黄酮类化合物含量测定方法和药理作用　金奥力牌清宁软胶囊　百合康牌葛根提取物软囊　百合康牌葛根提取物软囊　２０１００９１０　２０１　１０５２９　２０１　１０５０５　９．７９０８　１２．９９００　１０．１９１６　４．４７０３　８．８５１３　研究进展［Ｊ］．河北医药，２０１０，３２（８）：２０９５—２０９６．　［４］肖香兰，罗仁才，张楠．保健食品中总黄酮的测定方法［Ｊ］．中国卫生　检验杂志，２００７，１７（６）：１０３７—１０３８　百合康牌葛根提取物软囊　德惠牌绞股蓝泽泻茶　力克保健液　百邦葛灵胶囊　常青春牌睡得安胶囊　２０１　１０３２５　２０１００６２１　２０１　１０６２２　２０１　１０９０１　０．０５５８（ｍｇ／ｍ１）　１３．０９２５　２０．８４２５　７．７０５７　９．２７５６　［５］中华人民共和国卫生部，保健食品检验与评价技术规范［Ｍ］．中华人　民共和国卫生部，２００３．　１　１０９０５２９—１０１　国珍牌松花伴侣片　星久牌力尊胶囊　２０１１—０８—１５　２　２０１　１０８０３　［６］董宇．黄酮类化合物的提取方法研究及展望［Ｊ］．人参研究，２００９，２２　（４）：３３—３５．　同仁堂牌同仁益健茶　ｌ　１０７０１　ＡＪ　３６．３５５８　（收稿日期：２０１４．０２．１４）　◆ｌＩ一◆◆◆　◆◆●◆●◆◆　（上接１５第页）　这就证明何首乌的的切片较厚并且在进行干燥过程中　量有效保证奠定了坚实的基础。　３．２针对实验数据进行拟合的过程中，主要通过１　ｓｔｏｐｔ软　件完成数据拟合。此种方法表现出了诸多优点，因为无需　温度很低时，此时何首乌经过的干燥过程只包括１个降速；　当干燥过程中温度过高时，切片不论过厚或者过薄，干燥　过程都会经历２个干燥过程，分别为第１降速以及第２　降速。　进行初始值的设定，进而为拟合过程带来了诸多便利。在　对多自变量以及未知函数之间的关系进行拟合的过程中，　此种软件能够发挥自动搜索功能，筛选出最优的拟合公式，　最终有效完成数据处理。　参考文献　２．４在何首乌切片厚度相同的条件下，随着干燥温度的逐　渐升高，平衡含水量，Ｍｅ会呈现线性下降的状态；当干燥　温度没有发生变化的条件下，Ｍｅ会随着何首乌切片厚度的　逐渐增加也出现增加的情况。出现此种现象的主要原因是　［１］郭建华，田成旺，张铁军．鲜药研究的状况与展望［Ｊ］．药物评价研　究，２０１１，（３）．　何首乌干燥的温度值越高，何首乌就会越薄，进而增大传　质动力，何首乌中失去的水分就越多，最终导致平衡含水　率减小。　３讨论　［２］李林福，刘振丽，宋志前，等．何首乌炮制研究进展［Ｊ］　中国药房，　２００７，（３０）．　［３］钟珍，影响中药材质量的主要因素［Ｊ］．医学文选，２００６，（４）．　［４］史亚军，张丽．何首乌降脂有效部位提取工艺研究［Ｊ］．安徽医药，　２００９，（２）．　３．１　薄层干燥主要指的是将小于２０ｍｍ的物料层表面，充　分暴露在同一实验条件下所进行干燥的过程。对中药材进　行干燥的过程中，诸多都被划分为薄层干燥。在进行本次　［５］张瑞堂，石晓峰，马趣环，等［Ｊ］．中国医药导刊，２００９，（９）．　正交试验优选制何首乌的提取工艺　实验的研究过程中发现，通过利用薄层干燥理论能够有效　得出何首乌在干燥时水分发生的系列变化规律，为干燥质　［６］王颖莉，远志主要化学部位特性的研究及其干燥热解过程的影响［Ｄ］．　太原理工大学，２０１２．　（收稿日期：２０１４．０３．０３）