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常用培养基概念及配方

2022-07-07 来源:意榕旅游网


LB培养基:是微生物学实验中最常用的培养基,用于一般细菌培养,特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌,分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

PDA培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

改良MC培养基:用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数;原理:大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子;葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解,以辨别乳酸菌;琼脂是培养基的凝固剂;中性红为pH指示剂。

MRS培养基:乳酸菌培养基,由多种成分组成,适用于乳酸菌的生长,用来分离培养乳酸菌的一类培养基,一种常用的培养基,宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长,而且抑制其他菌的生长,因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色,之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌:凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌,目前至少可分为18个属,共有200多种。除极少数外,其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群,其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实,肠内乳酸菌与健康长寿有着非

常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等

自配高浓度污水:葡萄糖5550 mg/L+(NH4)2SO4,1170 mg/L+KH2PO4,170 mg/L+COD为5000 mg/L。

自配污水:葡萄糖555 mg/L+(NH4)2SO4,117mg/L+KH2PO4 17 mg/

L+CaC12 0,08 mg/L+MgSO4,1,534 mg/L+NaHCO3 550.8 mg/L+FeC13·6H2O

0.25 mg/L+C0D 500 mg/L+氨氮为30 mg/L.

一、LB培养基配制

1升LB培养培养基需:蛋白胨10g/L;酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离子水、琼脂15~20g/L(配制液体培养基不需要加,配制固体培养基时加入)。pH值用5mol/L NaOH溶液调至7.2-7.4(用精密pH试纸测定)。配置完后在高压锅内高压灭菌21min。

二、YPD培养基配制(酵母菌培养基)

1)溶解酵母膏/酵母粉(yeast extract)10g/L、蛋白胨(peptone)20g/L于单/双去离子水中,如制平板加入20g/L琼脂粉(配制固体培养基);

2)高压灭菌 121°C 20min;

3 加入20g/L葡萄糖 (dextrose或glucose,葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应);

注:葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌,也可以115℃15min灭菌。

三、MRS培养基配制(乳酸菌培养基)

蛋白胨(peptone)10g/L、牛肉膏(beef extract)10g/L、酵母菌粉(yeast extract)5g/L、醋酸钠(乙酸钠)5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、琼脂20g/L、吐温80 1ml/L、葡萄糖20g/L(因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制)、pH值用冰乙酸调至6.2~6.6(用pH试纸、仪器均可)250微升/L。

四、琼脂糖凝胶配制

凝胶板大孔为60ml,两小孔为30ml,梳子有5微升、10微升等

琼脂糖粉10g~12g/L,TBE0.5×(Tris硼酸,是一种PCR技术中用到的缓冲液。成分及终浓度(5×) [最终pH=8.25或8.3]用蒸馏水稀释至0.5×)

1)琼脂糖凝胶的制备:称取0.3g琼脂糖,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,置于三角瓶中,加入30ml TBE或TAE缓液,将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,加入溴化乙锭(凝胶染料),充分混匀。

2)胶板的制备:

①取有机玻璃内槽,洗净、晾干;②将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上,安好挡板,放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘,任其凝固,在距离底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近,

则拔出梳子时孔底将有破裂的危险,破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏;③将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中,使胶液缓慢地展开,直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。凝胶的厚度在3~5mm之间,检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡;④室温下静置30min左右,待凝固完全后,轻轻拔出梳子,在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5~1×TAE(Tris-乙酸) 或TBE(Tris-硼酸)工作液的电泳槽中使用,没过胶面1mm以上。

五、培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。

配制配方:马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15~20克、自来水1000毫升、自然PH。

配制步骤:其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管,加塞、包扎,灭菌(121℃)20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。

其他事项:

1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。

2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节

时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。

3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。

4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性。

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