结核分枝杆菌耐药基因快速检测研究进展

西南军医２０１６年１１月第１８卷第６期Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＳｕｒｇｅｏｎｉｎ　ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａ，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．６，Ｎｏｖ．，２０１６　・５６５・　ｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｔｈｏｐ　Ｓｕｒｇ　Ｒｅｓ，　２０１２，７：１７．　【１８］ＭＯＲＶＡＮ　Ａ，ＭＯＲＥＡＵＳ，ＣＯＭＢＯＵＲＩＥＵ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｔａｎｄｉｎｇ　ｒａｄｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗｉｈ　ａ　ｌｔｏｗ—ｄｏｓｅ　ｂｉｐｌａｎａｒ　［１　１］ＨＡ　ＹＣ，ＹＯ０　ＪＪ，ＬＥＥ　ＹＫ，ｅｔ　ａＬ　Ａｃｅｔａｂｕｌａｒ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｐｏｓｉｔｉｎｉｎｇ　ｕｓｉｎｇ　ａｎａｔｏｍｉｃ　ｌａｎｄｍａｒｋｓ　ｏｆ　ｔｈｅａｃｅｔａｂｕｌｕｍ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（ＥＯＳ　ｓｙｓｔｅｍ）ｏｆｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆｔｈｅ　ｔｏｍ－　ｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｎ　ａｎｔｅｒｉｏｒ　ａｐ－　［Ｊｊ．Ｃｌｉｎ　Ｏｒｔｈｏｐ　Ｒｅｌａｔ　Ｒｅｓ，２０１２，４７０（１２）：３５１５－３５２３．　１　ｌ２ｊ　ＢＲＥＭＥＲ　ＡＫ，ＫＡＬＢＥＲＥＲ　Ｆ，ＰＦＩＲＲＭＡＮＮ　ＣＷ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｏｆｔ—ｔｉｓｓｕｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｈｉｐ　ａｂｄｕｃｔｏｒ　ｍｕｓｃｌｅｓ　ａｎｄ　ｔｅｎｄｏｎｓ　ａｆｔｅｒ　ｔ０ｔａ１　ｈｉｐ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ：ｃｏｍｐａｒｉｓｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｄｉｒｅｃｔ　ｐｒｏａｃｈ：ａ　ｃｏｈｏｒｔ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　１０２　ｐａｔｉｅｎｔｓ【ＪＪ．Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｊ，　２０１６，９８－Ｂ（３）：３２６．　［１９］ＡＧＨＡＹＥＶ　Ｅ，ＢＥＣＫＡ，ＳＴＡＵＢ　ＬＰ，Ｐｆ　ａ１．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｂｉｌａｔｅｒａｌ　ｈｉｐ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｒｅｖｅａｌｓ　ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ｏｕｔｃｏｍｅ　ａｎｄ　ｆｅｗｅｒ　ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｔｈａｎ　ｔｗｏ・・ｓｔａｇｅ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ：ａ　ｐｒｏｓｐｅｃ－－　ｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　１８１９　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　５８０１　ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐｓ　ｎｔａｅｒｉｏｒ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｇｌｕｔｅａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｌＪＪ．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ　Ｂｒ，２０１１，９３（７）：８８６－８８９．　【ｌ３］ＢＥＲＧＩＮ　ＰＦ，ＤＯＰＰＥＬＴ　ＪＤ，ＫＥＰＨＡＲＴ　ＣＪ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｒｎ－　ｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｉｎｉｍａｌｌｙ　ｉｎｖａｓｉｖｅｄｉｒｅｃｔ　ａｎｔｅｒｉｏｒ　ｖｅｒｓｕｓ　ｐｏｓｔｅｄ・　ｏｒ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｕｓ－　ｆｒｏｍ　ａ　ｔｏｔａｌ　ｊｏｉｎｔ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｒｅｇｉｓｔｒｙ【ＪＪ．ＢＭＣ　Ｍｕｓｃｕｌｏ－　ｓｋｅｌｅｔＤｉｓｏｒｄ，２００９，１１（１１）：１—１０．　［２０］ＭＡＲＣ　Ａ，ＷＥＩＮＳＴＥＩＮ．ＪＯＨＮ　ＭＫ，ｅｔ　ａｌｏｎｅ－ｓｔａｇｅ　ｂｉｌａｔ—　ｅｒａｌ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔ　７５　ｙｅａｒｓ［ＪＪ．Ｏｒｔｈｏｐｅ－　ｄｉｅｓ，２００２，２５（２）：１５３—１５６．　１２ｌ　Ｊ　Ｋ　ＮＡＫＡＴＡ，Ｍ　ＮＩＳＨＩＫＡＷＡ，Ｋ　ＹＡＭＡＭＯＴＯ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｌｎｉｃａｌｉ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｒｅｃｔ　ａｎｔｅｒｉｏｒ　ｗｉｔｈ　ｃｌｅ　ｄａｍａｇｅ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ　Ａｍ，２０１１，３　（９３）：１５．　［１４］ＹＯＲＫ　ＰＪ，ＳＭＡＲＣＫ　ＣＴ，ＪＵＤＥＴ　Ｔ，ｅｔａＬ　Ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏ—　ｐｌａｓｔｙ　ｖｉａ　ｈｅ　ａｔｎｔｅｒｉｏｒ　ａｐｐｒｏａｃｈ：ｔｉｐｓ　ａｎｄ　ｔｒｉｃｋｓ　ｆｏｒｐｒｉｍａｒｙ　ａｎｄ　ｒｅｖｉｓｉｏｎ　ｓｕｒｇｅｒｙ　ｌＪＪ．Ｉｎｔ　Ｏｒｔｈｏｐ，２０１６：１－８．　ｍｉｎｉ－ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ　ａｐｐｒｏａｃｈ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｌｔｈｒｏｐｌａｓ－　ｔｙ，２００９，２４（５）：６９８—７０４．　【２２　Ｊ　Ａ　ＶＩＮＣＥＮＺＯ，Ｖ　ＭＡＵＲＩＺＩＯ，Ｃ　ＭＡＲＩＮＡ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍ—　ｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｗｉｔｈ　［１５］ＰＡＲＶＩＺＩ　Ｊ，ＲＡＳＯＵＬＩ　ＭＲ，ＪＡＢＥＲＩ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｏｅｓ　ｔｈｅ　ｓｕｒｇｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｔａｇｅ　ｂｉｌａｔｅｒａｌ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓ－　ｔｙ　ａｆｅｃｔ　ｂｌｏｏｄ　ｌｏｓｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，２０１３，　３７（１２）：２３５７．２３６２．　ａ　ｄｉｒｅｃｔ　ａｎｔｅｒｉｏｒ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｖｅｒｓｕｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｌａｔｅｒａｌ　ａｐ—　［１　６］ＭＯＳＫＡＬ　ＪＴ，ＣＡＰＰＳ　ＳＧ，ＳＣＡＮＥＬＬＩ　ＪＡ．Ａｎｔｅｒｉｏｒ　ｍｕｓｃｌｅ　ｓｐａｒｉｎｇ　ａｐｐｒｏａｃｈ　ｆｏｒ　ｔｏｔａｌ　ｈｉｐ　ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ【Ｊｊ．　Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｏｒｔｈｏｐ，２０１３，４（１）：１２—１８．　ｐｒｏａｃｈ：ｐｅｒｉｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｆｉｎｄｉｎｇｓ［ＪＪ．Ｊ　Ｏｔｒｔｈｏｐ　Ｔｒａｕｍａｔｏｌ，　２０１１，１２（３）：１２３．１２９．　（收稿Ｅｔ期：２０１６．０７　２０修护Ｅｔ期：２０１６．１０．０５）　（责任编辑：章敏）　［１７］俞银贤，马金忠．微创直接前方入路髋关节置换术相关　研究［Ｊ］．国际骨科学杂志，２０１４，３１（５）：０１２．　结核分枝杆菌耐药基因快速检测研究进展　税雪姣，黄富礼，黄永茂　［关键词］结核分枝杆菌，耐药基因，耐药性检测　［中图分类号］　Ｒ　３７８．９１　１　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１６７２—７１９３（２０１６）０６．０５６５—０４　耐药结核是重大的公共卫生问题并且成为控制　结核病的一大障碍…。２０１５年１０月２８　Ｅｌ，ＷＨＯ　２０１５　年全球结核病报告乜　中指出，２０１４年全球新发的结核　病病例约９６０万，其中新发耐多药结核（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｉ－　Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—７１９３．２０１６．０６．０２３　ｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ＭＤＲ－ＴＢ）病例４８万，新发的ＭＤＲ－ＴＢ　中不到１３万病例得到检测和报告，而开始接受　ＭＤＲ－ＴＢ治疗的病例约为１１万。中国每年耐多药结　核病患者达到近１０万人，其中初治患者耐多药结核　作者单位：６４６０００四川泸州，西南医科大学附属医院感染科（税雪姣、黄富礼）　通讯作者：黄永茂，Ｅ・ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇ５６１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ　・５６６・　为５．７％，复治患者高达２５．６％口］。在很多地区，因为　传统的结核药敏实验受生物安全、培养时间长等因素　影响，不能常规进行耐药结核检测，甚至最基本的结　核菌培养都不能开展，这表明大多数的耐多药结核病　例仍然不能确诊，导致临床上的治疗无针对性。目　前，具有生物安全要求级别低、检测时间短、敏感性较　高等特点的耐药结核分子生物学诊断方法日益受到　重视，现就结核分枝杆菌的基因快速检测研究进展综　述如下。　ｌ　结核分枝杆菌相关耐药基因　结核分枝杆菌耐药机制是十分复杂的。研究表　明，基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要原因　，单基因突变即可导致结核杆菌耐药　。结核分枝　杆菌对不同的抗结核药物有不同的耐药机制，而一种　抗结核药物又有多种耐药机制。现已明确的结核分　枝杆菌相关耐药基因总结如下　，见表１。　表１　结核分枝杆菌相关耐药基因　抗结核药物　相关耐药基因　异烟肼　ｋａｔＧ，ｉｎｈＡ、ａｈｐＣ、ｋａｓＡ、ｏｘｙＲ　利福平　ｒｏｐＢ　乙胺丁醇　ｅｍｂＡ、Ｂ、Ｃ操纵子　吡嗪酰胺　ｐｎｃＡ　链霉素　ｒｓｐＬ、ＩＴＳ　氟喹诺酮类　ｇｙｒＡ、ｇｙｒＢ　对氨基水杨酸　ｐａｐＡｌ、ｔｈｙＡ　２快速检测结核耐药基因方法　２．１　利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术　（Ｘｐｅｒｔ　Ｍｔｂ／ＲＩＦ）２０１４年，ＷＨＯ（（耐药结核病规划管　理指南伙伴手册》中指出，患者有耐药风险时建议优　先使用Ｘｐｅｒｔ　Ｍｔｂ／ＲＩＦ作为初始诊断工具　］。Ｘｐｅｒｔ　ＭＴＢ／ＲＩＦ技术是一种快速分子检测，它以ｒｐｏＢ基因　为靶基因，以半巢式实时荧光定量ＰＣＲ技术为基础，　系统自动运行并同时对结核杆菌复合群进行ＤＮＡ鉴　定及ｒｏｐＢ基因的突变检测，２ｈ即可完成测试并报告　结果，可以使用未经处理的痰液样本以及从肺外部位　的临床标本完成　。国内外很多文献报道，大多数　情况下，利福平耐药几乎都合并异烟肼耐药，即利福　平耐药就很有可能是耐多药结核。Ｘｐｅｒｔ　Ｍｔｂ／ＲＩＦ法　可以有效地使用在资源匮乏的地区，以简化患者的早　期准确诊断，从而可能降低发病率与诊断延迟ｎ　。　２．２线性探针杂交试验（１ｉｎｅ　ｐｒｏｂｅ　ａｓｓａｙｓ，ＬＰＡｓ／Ｌｉ．　ＰＡ）　线性探针杂交试验是ＷＨＯ推荐作为结核耐药　快速诊断的分子方法，对培养的结核杆菌及涂阳标本　均适用。方法为对提取的结核杆菌ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩　增，运用反向杂交技术，让扩增产物与预先固化在试　纸条上的特异性探针杂交，通过检查耐药相关基因突　变以检测抗结核药物耐药性ｎ　。　。线性探针杂交试　验是通过ＧｅｎｏＴｙｐｅＭＴＢＤＲ试剂盒完成的，包括Ｇｅｎ—　ｏＴｙｐｅ￣ＭＴＢＤＲｐｌｕｓ　（Ｈａｉｎ　Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ，ＧｍｂＨ，　Ｎｅｈｒｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）和ＩＮＮＯ—ＬｉＰＡ　Ｒｉｆ．ＴＢ（Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔ—　ｉｃｓ，Ｇｈｅｎｔ，Ｂｅｌｇ　ｉｕｍ）２种。由德国Ｈａｉｎ公司推出的　ＧｅｎｏＴｙｐｅ￣ＭＴＢＤＲｐｌｕｓ耐多药检测试剂盒，针对结　核分枝杆菌复合群耐利福平和异烟肼主要耐药基因　进行分子生物学检测，其设计的野生型探针包含各自　基因最重要的耐药区，可同步检测利福平和异烟肼的　耐药性。比利时Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ公司ＩＮＮＯ．ＬｉＰＡ　Ｒｉｆ．ＴＢ　试剂盒针对利福平耐药基因的检测可以在６ｈ内报告　药敏检测结果，不过检测结果需人工判断，操作流程　复杂，需要专门的仪器，很难标准化，并且只适用于抗　酸染色阳性的样本。　２－３　等位基因特异性多重’ＰＣＲ法（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ａ１．　１ｅｌｅ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＰＣＲ，ＭＡＳ．ＰＣＲ）　等位基因特异性　ＰＣＲ法是通过ＰＣＲ及凝胶电泳直接检测出ＤＮＡ中的　各种点突变，也是一种基于ＰＣＲ的新方法。ＭＡＳ—ＰＣＲ　可直接用于痰标本，与ＤＳＴ对比，其敏感性及特异性　接近１００％，并且快速、经济、易于操作，对于临床有很　大的帮助ｎ　。ＭＡＳ．ＰＣＲ的基本原理为设计野生型及　突变型２个等位基因特异性寡核苷酸（ＡＳＯ）引物，等　位基因特异性碱基置于引物的３’端，通过观察电泳　胶上溴化乙锭染色的ＤＮＡ扩增带即可直接鉴定等位　基因的点突变类型。结果中有特异扩增带，则表示被　测基因含有该种突变，没有特异扩增带，则表示没有　这种突变　。ＭＡＳ．ＰＣＲ可用于ｋａｔＧ　３１５，ｒｐｏＢ　５３１，　ｇｙｒＡ　９４，ＩＴＳ　１４０１等密码子突变基因的检测ｎ　。　２．４液相芯片技术（（Ｌｕｍｉｎｅｘ　ｘＭＡＰＴＭ）　液相芯　片技术是对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模分析　的一种诊断技术。由美国Ｌｕｍｉｎｅｘ公司研发，又称微　球依赖的悬浮点阵技术（Ｌｕｍｉｎｅｘ　ｘＭＡＰＴＭ）。该技　术可以对一份微量标本同时进行多达１００种不同分　析指标的检测ｎ　。其基本原理为在不同荧光编码的　聚苯乙烯微球上进行抗原一抗体、酶一底物、配体一　受体的结合反应及核酸杂交反应，待加入待检样本　后，在液相条件下，靶分子与微球表面交联的捕获分　子发生特异性结合。最后，微球随液流排成单列传送　至Ｌｕｍｉｎｅｘ　１００仪器自动分析，通过红、绿两束激光分　别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目　的，仅需少量样本即可同时定性、定量检测同一样本　西南军医２０１６年１１月第ｌ８卷第６期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｌｉｔａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｏｎｉｎ　ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａ，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．６，Ｎｏｖ．，２０１６　・５６７・　中的多种不同目的分子。目前相关报道ｎ　，液相芯片　技术可以用于一线抗结核药物耐药基因的检测。　２．５基因芯片技术（Ｇｅｎｅ　Ｃｈｉｐ）基因芯片技术是一　种需要固定仪器、试剂盒的高科技、高通量检测手　段。其方法对样本结核分枝杆菌核酸提取后进行　ＰＣＲ扩增，扩增产物与探针杂交，最后芯片扫描及结　果判读，从而发现突变的耐药基因。基因芯片技术可　以直接应用于痰以及其他临床标本的检测，其针对结　核分枝杆菌核酸的检测，不需要接触大量细菌，故也　是一种更加安全的检测方法，结核耐药基因检测需要　４ｈ。利用基因芯片技术可同时测定所有一线抗结核　药物及喹诺酮类药物的耐药性，极大地缩短了检测时　间，为制定临床用药方案提供便利　。我国博奥公司　研发的结核分枝杆菌耐药性测定试剂盒一ＤＮＡ微阵　列芯片法，可以检测利福平和异烟肼的耐药性，为　ＭＴＢ的快速耐药性检测提供了有效方法。基因芯片　不足之处在于芯片制备复杂，样品的准备与标记繁　琐，检测成本较高，相关检查设备昂贵乜　。　２．６实时荧光ＰＣＲ探针溶解曲线法（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　Ｒｅ．　ａｌ—Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍｅｌｔｉｎｇ　Ｃｕｒｖｅ　Ａｓｓａｙ）　实时ＰＣＲ又称　荧光定量ＰＣＲ或ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ，该技术在常规ＰＣＲ基　础上运用荧光能量传递技术，加入荧光标记探针，把　核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一　起，借助于荧光信号来检测ＰＣＲ产物。实时ＰＣＲ反　应具有快速性、灵敏度高、可重复性、低污染风险等特　点，但由于其成本高、操作复杂，并且对设备要求高，　所以没有得到广泛的应用。探针溶解曲线是利用探　针与不同的靶序列杂交后形成的双链ＤＮＡ熔点的差　异来区分不同的靶序列。厦门致善生物科技股份有　限公司推出结核耐药突变实时ＰＣＲ探针溶解曲线诊　断试剂盒可以降低成本，操作简单，机器自动判读，３ｈ　可获得结果，可用于异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉　素、喹诺酮类等结核耐药基因的快速检测　。　２．７焦磷酸测序技术焦磷酸测序技术是一种新型　的实时ＤＮＡ测序技术，该技术是依靠生物发光反应　进行的，无需电泳和荧光标记，操作简单、结果准确，　同时能提供精确的碱基序列信息。由于该技术适用　于对已知的较短ＤＮＡ序列的测序分析，所以非常适　合结核杆菌的耐药性检测。焦磷酸测序技术可用于　检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉　素、阿米卡星等抗结核药物的耐药性。存在的主要问　题是操作繁琐，条件要求严格，要测的耐药基因种类　很多，无效突变也被检出，而且需要昂贵的仪器设备，　费用较贵　＿２６］。　３总结　ＭＤＲ．ＴＢ、广泛耐药结核（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ　ｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｉ．　ｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ。ＸＤＲ．ＴＢ）甚至是全耐药结核（ｔｏｔａｌｌｙ　ｄｒｕｇ．ｒｅｓｉｓｉｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ＴＤＲ－ＴＢ）在世界各国均有　流行。因其治疗时间长、治疗费用高、治愈率很低、病　死率极高，目前在世界范围内备受关注。所以，准确　快速的诊断方法，对于结核治疗方案的实施具有重要　的意义　。但目前所用的快速检测方法检测的抗结　核药物不够全面，且费用和技术要求较高，以检测异　烟肼、利福平为主，部分可以检测氟喹诺酮类、氨基糖　苷类等药物，耐药检测最终还是以传统药敏试验为金　标准。所以，需要进一步研究有更高特异性、经济ｊ生、　适用性更强的方法用于结核分枝杆菌耐药的诊断乜　。　【参考文献】　［１］沈鑫，潘启超，肖和平结核病研究新进展［Ｊ］．上海预防医　学，２０１６，２８（３）：１４３．１４６．　Ｉ　２　ｌ　ＷＯＲＬＤ　ＨＥＡＬＴＨ　ＯＲＧＡＮＩＺＡＴＩＯＮ．２０１５　Ｇｌ０ｂａｌ　ｔｕｂｅｒ．　ｃｕｌｏｓｉｓ　ｒｅｐｏｔ．Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，２０１５．　［３］　ＺＨＡＯ，Ｙ　ｅｔ　ａ１．Ｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｕｒｖｅｙ　ｏｆ　ｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｉｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕ－　ｌｏｓｉｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ．Ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　２０１２．３６６：２１６１—２１７Ｏ．　［４］ＧＡＮＤＨＩ　ＮＲ，ＮＵＮＮ　Ｐ，ＤＨＥＤＡ　Ｉ（，ｅｔａ１．Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓ—　ｋａｎｔ　ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ　ｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：ａ　ｔｈｒｅａｔ　ｔｏ　ｇｌｏｂａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｌＪＪ．Ｌａｎｃｅｔ，２０１０，３７５　（９７２８）：１８３０．１８４３．　［５］ＤＡＬＬＡ　ＣＯＳＴＡ　ＥＲ，ＲＩＢＥＩＲＯ　ＭＯ，ＳＩＬＶＡ　ＭＳ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｋａｔＧ，ｏｘｙＲ－ａｈｐＣ　ａｎｄ　ｉｎｈＡ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｉｎ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒ　ｃｕｌｏｓｉｓ　ｃｌｎｉｉｃａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｅ　ｆａｍｉｌｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｐｒｅｖａｌｅｎｔ　ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａ　［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００９，９：３９．　［６］伍静．结核分枝杆菌的耐药基因及其相关分子机制［Ｊ］．现　代生物医学进展，２０１１，ｌ１（２２）：４３８２．４３８５．　［７］林楠．中国结核分枝杆菌群体基因组的分析ＥＤ］．福建农　林大学，２０１４．　［８］　ＷＯＲＬＤ　ＨＥＡＬＴＨ　ＯＲＧＡＮＩｚＡＴＩＯＮ，Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｄｉａｇ－　ｎｏｓｔｉｃｓ　Ｘｐｅｒｔ　ＭＴＢ／ＲＩＦ　ｔｅｓｔ：ＷＨＯ　ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ．　２０１３，Ｗｏｄｄ　Ｈｅａｌｈｔ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ：Ｇｅｎｅｖａ．　［９］杨慧娟，马利，陈连勇．Ｘｐｅｒｔ　ＭＴＢ／ＲＩＦ技术对结核分枝　杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究［Ｊ］．中国卫生　检验杂志，２０１５，０（２３）：４０５６．４０５９．　［１０］ＬＡＷＮ　ＳＤ，ＮＩＣＯＬ　ＭＥ　Ｘｐｅｒｔ（Ｒ）ＭＴＢ／ＲＩＦ　ａｓｓａｙ：ｄｅｖｅｌ－　ｏｐｍｅｎｔ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｒａｐｉｄ　ｍｏ－　ｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｆｏｒ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ　ｒｅｓｉｓ—　ｔａｎｃｅ．Ｆｕｔｕｒｅ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１　１．６：１０６７．１０８２．　・５６８・　西南军医２０１６年１１月第１８卷第６１１１１　Ｊ０ｕｍａ１　０ｆＭｉｌｉｔａｒｖｓｕ控ｅ０ｎ．ｎ　Ｓ叫ｍｗｅｓｔＣｈｉｎａ．ｖ０１．１８．Ｎ０．６．Ｎ０ｒｖ一２０１６　ＮＡＩＯＴＯＶ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ－ｓｐｏｌｉｇｏ—ｒｉｆａｍｐｉｎ－ｉｓｏｎｉ－　ａｚｉｄ　ｔｙｐｉｎｇ：ａｎ　ａｌｌ・－ｉｎ・－ｏｎｅ　ａｓｓａｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｓｕｒｖｅｉｌｌｎｃｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｍｕｌａｔｉｄｒｕｇ－－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｏｎ　Ｌｕ－－　ｌ１ｌ　Ｊ　Ｂ０ＥＨＭＥ　ＣＣ，ＮＩＣＯＬ　Ｍ　ＮＡＢＥＴＡ　ｅｔ　ａ／．Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ，　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｄｅｃｅｎｔｒａｌｉｓｅｄ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｘｐｅｒｔ　ＭＴＢ／ＴＩＦ　ｔｅｓｔ　ｆｏｒ　ｄｉａｇｎｏｓｅｓ　ｏｆ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ａ　ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ　ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｍｉｎｅｘ　ｄｅｖｉｃｅｓ￣Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０１３，５１：３５２７．３５３４．　［２０］赵连爽，代娣，陈昕，等．基因芯片在分枝杆菌菌种鉴定　及结核耐药基因检测的诊断价值［Ｊ］．检验医学与临床，　２０１４，１１（１２）：１５９５．１５９８．　ｓｕｄｙ．ｔＬａｎｃｅｔ，２０１ｌ，３７７（９７７６）：１４９５－１５０５．　１　１２］ＭＡＤＨＵＲＩ　Ｋ，ＤＥＳＨＡＰＡＮＤＥ　Ｓ，ＤＨＡＲＭＡＳＨＡＬＥ　ｓ，　Ｕ【ｉｌｉｔｖ　ｏｆＬｉｎｅ　Ｐｒｏｂｅ　Ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｅａｒｌｙ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊｊ．Ｊ　Ｇｌｏｂ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２０１５　Ａｐｒ－Ｊｕｎ，７（２）：６０－６５．　【１３　Ｊ　ＹＡＣＯＯＢ　ＦＬ，ＰＨＩＬ０ＭＩＮＡ　ＪＯＳＥ　Ｂ，ＫＡＲＩ　ＡＫＡＲＡＮ　［２１］周杨，欧喜超，乐军，等．基因芯片诊断耐多药结核病的　临床多中心研究［Ｊ］．中华检验医学杂志，２０１１，３４（９）：　７９３．７９９．　ＬＥＬＩＴＨＡ　ＳＤ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｉｍａｒｙ　Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｔｕｂｅｒｃｕ－　ｌｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｔｖ　ｏｆ　Ｌｉｎｅ　Ｐｒｏｂｅ　Ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　Ｉｔｓ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｍｅａｒ－Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　Ｓｐｕｔｕｍ　Ｓａｍｐｌｅｓ　ｉｎ　ａ　Ｔｅｒｔｉａｒｙ　Ｃａｒｅ　Ｈｏｓｐｉ—　ｔａｌ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈ　Ｉｎｄｉａ［Ｊ］．Ｊ　Ｐａｔｈｏｇ，２０１６，２０１６：６２３５６１８．　１１４＿ＳＨＡ　Ａ　Ｓ，ＭＡＤＡＮ　Ｍ，ＡＧＲＡＷＡＩ，Ｃ，ｅｔａＬ　Ｏｅｎｏｔｙｐｅ　ＭＴＢＤＲ　ｐｌｕｓ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ　ａｎｄ　ｉｓｏｎｉａｚｉｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．　Ｉｎｄｉａｎ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ［Ｊ］．２０１４　Ｊｕｌ—Ｓｅｐ，５７（３）：　４２３．４２６．　［１　５］ＡＬＬＥＧｕＩ　Ｚ，ＧＨＡＲＩＡＮＩ　Ａ，ＤＲＡＯＵＩ　Ｈ，ｅｔ　ａＺ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｓｏｎｉａｚｉｄ　ａｎｄ　ｒｉｆａｍｐｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕ—　ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｂｙ　ａ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ａｌｌｅｌｅ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ａｓｓａｙ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２０１２　Ｍａｒ，１　（１）：３４．３９．　１１６　Ｊ　ＷＡＮＧ　Ｘ，ＪＩＡＯ　Ｊ，ＸＵ　Ｗ　ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ　ｎａｄ　ｅｃｏ—　ｎｏｍｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ・・ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ・・　ｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｒａｚ　Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２０１３　Ｎｏｖ．Ｄｅｃ，１７（６）：６６７．６７１．　１　１　７　Ｊ、　ＤⅥ　Ｖ，ＳＨＥＴＴＹ　Ａ，ＲＯＤＲＩＧＵＥＳ　Ｃ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ａｌ－　ｌｅｌｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＰＣＲ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔｎａｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，２０１２，９２（３）：　２３６．２４２．　１１８］ＬＥＥ　ＳＨ，ＣＨＯＩ　ＨＢ，ＹＵ　Ｓ　ａ／．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｆｒｓｔ．１ｉｎｅ　ｎａｔｉ－－ｕｔｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｂｙ　ａｌｌｅｌｅ・－ｓｐｅ・・　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