大巴车晚上2点到5点不可以在高速公路行驶。具体如下：
1、对小车等其它车辆目前并没有明确禁行上高速时间的相关政策，但禁止长途客运车辆在凌晨2点到5点在高速上行驶，主要是为了安全起见。这是因为在这个时间段已经到了深夜，属于夜间行车，司机们不免会有疲倦。在这段时间禁止大巴车上高速，可以防止因为疲劳驾驶导致交通事故，司机也可以好好利用这个时间休息；
2、即使有明文规定了长途客运车辆在凌晨2点到5点禁止在高速上行驶，驾驶人们在平时的驾驶中也要注意休息，避免长时间驾驶。
道路旅客运输企业应当规范运输经营行为如下：
1、班线客车要严格按照许可的线路、班次、站点运行，在规定的停靠站点上下旅客，不得随意站外上客或揽客，不得超员运输。驾乘人员要对途中上车的旅客进行危险品检查，行李堆放区和乘客区要隔离，不得在行李堆放区内载客；
2、客运包车要凭包车客运标志牌，按照约定的时间、起始地、目的地和线路，持包车票或包车合同运行，不得承运包车合同约定之外的旅客。驾乘人员要对旅客携带物品进行安全检查。
法律依据：
《道路旅客运输企业安全管理规范（试行）》第四十五条
道路旅客运输企业在安排运输任务时应当严格要求客运驾驶人在24小时内累计驾驶时间不得超过8小时（特殊情况下可延长2小时，但每月延长的总时间不超过36小时），连续驾驶时间不得超过4小时，每次停车休息时间不少于20分钟。
对于单程运行里程超过400公里（高速公路直达客运600公里）的客运车辆，企业应当配备两名以上客运驾驶人。对于超长线路运行的客运车辆，企业要积极探索接驳运输的方式，创造条件，保证客运驾驶人停车换人、落地休息。对于长途卧铺客车，企业要合理安排班次，尽量减少夜间运行时间。
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