比较液体培养与改良罗氏培养检测结核分枝杆菌的应用效果分析

分枝杆菌的应用效果分析

摘要：目的 比较分析液体快速培养与改良固体罗氏培养检测结核分枝杆菌的应用效果。方法 选取2018年10月到2019年10月到我中心就诊的活动性肺结核患者80例,对每份病例标本分别进行改良罗氏培养法和液体培养法,统计改良罗氏培养法和液体培养法的阳性率、污染率及培养时间。结果 改良罗氏培养法和液体培养法的阳性符合率分别为10%(8/80)和11.25%(9/80)。所需的培养时间分别为28.0(25.0～31.0)d和16.5(14.0～19.0)d。结论 液体培养法阳性率与改良罗氏培养法基本一致,报告时间平均缩短至16.5d,比改良罗氏培养法提前10.0d以上,为临床早诊断、早治疗提供了可靠依据,而且为后续进行的药敏试验提供了可靠依据。

关键词：液体培养法；改良罗氏培养法；结核分枝杆菌

To compare the application effect of liquid culture and modified Roche culture in detection of Mycobacterium tuberculosis

Abstract: Objective To compare and analyze the effect of rapid liquid culture and improved solid Roche culture in the detection of Mycobacterium tuberculosis.Methods a total of 80 active pulmonary tuberculosis patients who visited our center from October 2018 to October 2019 were selected. The positive rate, contamination rate and culture time of the improved roche culture method and liquid culture method were counted for each case specimen.Results The positive coincidence rate of improved Roche culture method and liquid culture method was 10%(8/80) and 11.25%(9/80), respectively.The required culture time was 28.0(25.0 ~ 31.0)d and 16.5(14.0 ~ 19.0)d,

respectively.Conclusion The positive rate of the liquid culture method was basically consistent with the improved Roche culture method, and the reporting time was shortened to 16.5d on average, more than 10.0d earlier than the improved Roche culture method, which provided a reliable basis for early clinical diagnosis and treatment, as well as a reliable basis for the subsequent drug sensitivity test.

Keywords:

liquid

culture

method;Improved

Roche

culture

method;Mycobacterium tuberculosis

引言

结核病是由结核分枝杆菌引起的、经呼吸道传播，严重危害人类健康的慢性传染病。我国结核病患病人数较多，是世界结核病高负担国家之一。有研究报道，肺结核患者以被动发现为主，比例高达85.97%。患者常因不明原因低热、咳嗽、消瘦等症状前来就诊，此时应尽快明确诊断，查明病因或进行快速鉴别诊断。结核病的检测方法中，痰涂片方法简单易操作，但阳性率较低；改良罗氏培养法目前广泛应用于结核分枝杆菌培养，并作为结核病诊断的金标准，但由于结核分枝杆菌生长缓慢，一般情况下采用该方法需要4-8周，给临床日常诊疗工作带来不便。液体培养法具有阳性率高、培养时间短等优点。本研究通过分析82例活动性肺结核患者痰培养资料，比较液体培养法与改良罗氏培养法在结核分枝杆菌培养中的效果，现报道如下。

1.资料与方法 1.1一般资料

选取2018年10月到2019年10月到我中心就诊的活动性肺结核患者80例，男35例，女45例，年龄12-86岁，平均年龄（42.1±6.5）岁。纳入研究患者痰标本要求为黏液痰、干酪痰或含有少量新鲜血液的痰。

1.2仪器与试剂

[1]

抗酸染色液；固体培养基：改良罗氏固体培养基；液体培养管：MGIT960液体培养管、MGIT生长添加剂和MGIT PANTA；前处理液：NaOH溶液、氢氧化钠-N-乙酰基-L半胱氨酸溶液、磷酸盐缓冲液均按BD工作方案制备。相关仪器：全自动Bactec MGIT960；培养箱；台式高速（冷冻）离心机；涡旋振荡器。生物安全柜：ESCO AirStreamⅡ级A2型生物安全柜。

1.3方法

改良罗氏（L-J）培养法：参照《结核病实验室检验规程》分枝杆菌分离培养标准化操作程序，进行分枝杆菌固体培养。在生物安全柜内用4%NaOH对痰标本进行处理，接种到罗氏培养基上，将接种好的培养基放置在37℃培养箱中培养。结果判读：培养基表面长出淡黄色不透明、粗糙、干燥、凸起呈菜花样菌落，为结核杆菌典型菌落形态。挑取少量菌落涂片，经抗酸染色，镜检确定为抗酸杆菌后，报告固体培养分枝杆菌阳性。

液体培养：参照《结核病实验室检验规程》分枝杆菌分离培养标准化操作程序，进行分枝杆菌液体培养。在生物安全柜内用氢氧化钠－Ｎ－乙酰基－Ｌ半胱氨酸溶液对痰标本进行处理，加入磷酸盐缓冲液，高速（冷冻）离心机中离心15min。等待离心的同时，将MGIT PANTA与MGIT生长添加剂混匀，用无菌有刻度移液管移取0.8mL该混合液加入MGIT管中备用。离心完毕，弃上清液，加入1mL磷酸盐缓冲液混匀，吸取0.5mL加入MGIT管中，拧紧盖子。将接种完毕的MGIT管放入全自动Bactec MGIT960仪器内进行孵育，等待仪器自动报结果。仪器报告阳性的MGIT管，进行涂片抗酸染色，确认是否为抗酸杆菌阳性，若为阳性则报告液体培养分枝杆菌阳性。

1.4统计学处理

采用Excel20010建立数据库，SPSS.20.0软件对数据进行统计处理和分析。计量资料以中位数（最大值～最小值）表示，组间比较采用秩和检验；计数资料以率或例数表示，组间比较采用χ2检验。分别计算痰涂片抗酸染色镜检与改良罗氏（L-J）培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性符合率；计算改良罗氏

[2]

（L-J）培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性率、污染率及培养时间。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

比较两种方法培养结果即培养时间，改良罗氏培养法和液体培养法的阳性率分别为10%(8/80)和11.25%(9/80)。所需的培养时间分别为28.0(25.0～31.0)d和16.5(14.0～19.0)d。改良罗氏（L-J）培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性率差异无统计学意义（χ2=0.001，P=0.970）。详见表1。

表1 两种方法阳性检出率对比

阳性（n，%） 阴性（n，%） 时间（d） 液体培养法 9（11.25） 69（87.5） 16.5 改良罗氏培养法 8（10） 70（90） 28.0 3.讨论

分枝杆菌培养是结核病诊断的金标准，改良罗氏（L-J）培养法耗时过长，一般培养需要4-8周，且阳性率不超过50%，不利于早期发现肺结核患者和早期诊断耐多药结核病患者。1996年美国BD公司研制出Bactec MGIT960分枝杆菌全自动快速培养系统，广泛应用于结核病诊断和临床鉴别诊断。

本研究显示，改良罗氏（L-J）培养法和液体培养法的阳性率分别为10%(8/80)和11.25%(9/80)。所需的培养时间分别为28.0(25.0～31.0)d和

[3]

16.5(14.0～19.0)d。改良罗氏（L-J）培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性率差异无统计学意义（χ2=0.001，P=0.970）。

综上所述，MGIT960系统液体培养法收费较低，不需要使用特殊仪器，操作简单，是一种比较理想的分枝杆菌快速培养方法。与传统的抗酸染色和改良罗氏（L-J）培养法相比，MGIT960系统液体培养法具有符合率高、特异性强、灵敏度高的特点。这种经济、实用、及时、有效的检测方法更加适宜在基层结核病防治机构推广应用。

参考文献

[1]叶碧峰,雷永良,王晓光,刘敏,陈秀英.BACTEC~(TM) MGIT~(TM) 320液体快速培养在检测结核分枝杆菌及耐药性中的应用[J].实用预防医学,2016,23(02):232-233.

[2]孙黎萍,何鑫.液体MGIT培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌[J].生物技术世界,2015(12):12-13+15.

[3]朱丽娜,雷永良,俞凯狄,陈秀英,刘国华,赖聪娟.液体快速培养在结核分枝杆菌分离培养中的应用[J].中国卫生检验杂志,2015,25(13):2112-2114.