水酶法提取玉米胚芽油-酶解工艺参数优化

生物工程　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１５，０９．０３３　食品研究与再发　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ　２０１５年５月　第３６卷第９期　水酶法提取玉米胚芽油一酶解工艺参数优化　张志伟，王素梅’　（漯河双汇肉业有限公司技术中心，河南漯河４６２０００）　摘要：研究水酶法提取玉米油酶解ｘ－￣固液比、酶制剂种类、反应温度、时间及ｐＨ对清油提取率及酶解液中还原　糖量的影响。响应面分析试验结果表明：采用２％的杰能科纤维素酶，固液比为１：８，酶解ｐＨ为４．５，酶解温度为　５１．９　ｏＣ，酶解时间为５．２４　ｈ，清油提取率为８４．１％。　关键词：固液比；酶制剂种类；反应温度；酶解时间；ｐＨ　Ａｑｕｅｏｕｓ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｒｎ　Ｇｅｒｍ　Ｏｆ－Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉ—ｗｅｉ．ＷＡＮＧ　Ｓｕ—ｍｅｉ　（Ｌｕｏｈｅ　Ｓｈｕａｎｇｈｕｉ　Ｍｅａｔ　ＣＯ．，ＬＴＤ．，Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｌｕｏｈｅ　４６２０００，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ，ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅｓ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｐＨ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｈ　ｏｆ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　Ｓｕｒｆａｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＲＳＡ）　ｔｅｓｔ．８４．１％ｆｒｅｅ　ｏｉｌ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｈｅｎ　ｃｏｒｎ　ｇｅｒｍ　ｗａｓ　ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　ｂｙ　２％ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　５　１．９℃　ｆｏｒ　５．２４ｈ，ａｔ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ　１：８（ｄｒｙ　ＣＯｒｎ　ｇｅｒｍ：ｗａｔｅｒ）．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ；ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅｓ；ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；Ｔｉｍｅ；ｐＨ　作者简介：张志伟（１９７４一），男（汉），高级工程师，硕士，现从事肉制品加工及肉品研究。　通信作者　２２．９和４．６５％、２５．４％。　藏中其总酚含量不降反升，可以推断西瓜含有与其他　几种水果不同的物质，导致其总酚含量变化趋势与其　由图５可知，西瓜汁中多酚的含量较低，贮藏中　其总酚含量不降反升，一１０。ｃ和２０℃贮藏２５　ｄ后其总　酚含量分别上升１１－３％和３２．５％；５℃以上贮藏１０　ｄ　他几种果汁不同【ｌＩｑ，建议西瓜的贮存在５℃～１０℃，即　可保鲜，也能增加总酚含量。　参考文献：　［ｌ１　石碧，］狄莹．植物多酚【Ｍ】．北京：科学出版社，２０００：８—５６　［２２］　苑博．果汁多酚的加工稳定性及与蛋白质作用对体外消化的影　响［Ｄ】．无锡：江南大学，２０１　１　后，总酚含量增长迅速，原因为贮藏期间蔗糖、有机酸　等转化为合成酚类物质的底物，促使总酚含量升高。　４结论与讨论　果实在采摘后都要冷藏，考虑到冷藏的经济性及　总酚含量的保留，得出以下结论：　【３】沈佩仪，徐金龙，李傲，等．菠萝皮中总多酚的纯化工艺研究［Ｊ］．食　品与机械，２０１２，２８（２）：１３９—１４１　［４］赵晓云，赵博等，邢嫒嫒，等．荷叶多酚的微波辅助提取工艺优化　及其抗氧化活性研究叨．中国酿造，２０１０（３）：７９—８３　［５】杨薇，张晓旭．苹果多酚功能及其作用机理的研究进展［Ｊ】．食品　研究与开发，２０１２（１）：１９３—１９６　新鲜杨梅总酚含量较高，其收获期很短、易腐败，　因此长期低温冻藏有利于杨梅酚类物质的保持，建议　在一５℃及以下温度贮藏。新鲜山楂、苹果的总酚含量　低于杨梅，一ｌ０℃到２０℃温度贮藏其总酚都有所减　少，考虑到贮藏经济型，建议在５℃冷藏条件下即可较　稳定保藏圈。西瓜汁中多酚的含量较低，一ｌ０℃　２０℃贮　［６】林玉芳，陈清西等，关夏玉，等．橄榄总多酚提取工艺优化研究［Ｊ】　．中国农学通报，２０１　１，２７（５）：３９６—４００　收稿日期：２０１３—１２—２９　张志伟，等：水酶法提取玉米胚芽油一酶解工艺参数优化　生物工程　＿＝＝　Ｊ７６　玉米胚芽中脂肪含量高达４Ｏ％一５０％，是一种丰　固液比是指酶解体系中玉米胚（干基）与水的比　例。从图１可以看出，当玉米胚芽浓度较低，即固液比　富的油料资源，玉米胚芽油营养价值高，富含亚油酸　和多种维生素，并易于为人体吸收，国外称之为营养　健康油。玉米胚芽蛋白质具有较高的营养价值，其生　物学价值高达６４．７％『ｌ＿。　传统提油方法有压榨法和浸出法，虽然出油率　较小时，反应速度慢，还原糖生成量少，清油提取率低，　这是因为当固液比较小时，底物浓度和酶浓度都较　低，影响酶反应速度。随着固液比的增加，底物浓度和　酶浓度都相应提高，反应速度加快，还原糖和清油提　高，但提油后的饼粕利用率较低，且溶剂浸出法还需　脱溶剂过程，投资大。水酶法提油是一种新型的提油　方法，能将油和蛋白质同时分离，且温和的加工条件　取率呈直线增加，当固液比为１：８时，还原糖和清油　提取率最高，分别为１５．６　ｇ／Ｌ、８３．１％。但固液比增加到　一定程度后，即反应物浓度增加到一定值时，由于反　使蛋白质保持较高的营养价值和功能性质，又使色素　应体系浓度过高，黏度大，体系流动性差，酶与底物接　及其它有毒物质溶于水而除去圆。目前文献报道出油　率较低，仅有７９％，本文对玉米胚芽水酶法提油酶解　工艺参数进行优化，旨在确立最佳酶解条件。　１材料与方法　１．１．１原料与试剂　玉米胚芽，购于河南荥阳淀粉厂。　１．１．２仪器设备　ＹＸ一４００Ａ双层立式电热蒸气消毒器：上海三申医　疗器械厂；ＬＸＪ一Ⅱ离心机：上海医用分析仪器厂；５０１　型超级恒温器：上海试验总厂；ＪＢ３００一Ｄ强力电动搅拌　机：上海标本模型厂；胶体磨：廊坊机械总厂。　１．１－３测定方法　纤维素酶、半纤维素酶及果胶酶酶活测定阎：ＤＮＳ法。　水酶法提油工艺路线ｌ３　：取玉米胚芽１　ｋｇ（干基　计）以１：１５的比例浸泡于０．０５　ｍｏｌ／Ｌ的柠檬酸缓冲液　中后，在蒸气消毒器中进行热处理，热处理条件：ｐＨ４、　１１０　ｏＣ、６０　ａｒｉｎ，然后沥干，加水，胶体磨处理８次，调　ｐＨ，加酶，５０℃保温，酶解后离心得清油。　清油提取率（％）＝清油量，胚芽总油量ｘ　１００　２结果与讨论　２．１固液比对清油提取率及还原糖量的影响　固液比对清油提取率及还原糖量的影响见图１。　固液比　图１　固液比对清油提取率及还原糖量的影响　Ｆｉｇ．１　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆｆｒｅｅ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　注：酶解条件为ｐＨ４．５、５０　ｏＣ、６　ｈ，２％加酶量。　触机会反而减少，反应速度下降，因此，随着底物浓度　的提高，还原糖和清油提取率逐渐下降，当固液比为　１：４时，还原糖和清油提取率分别为１３．０　、７２％。　因此，水酶法提取玉米油适宜固液比为１：８最佳。　２．２不同商品纤维素酶制剂对清油提取率及还原糖　量的影响　不同商品纤维素酶制剂对清油提取率及还原糖　量的影响见表１。　表１不同商品纤维素酶制剂对清油提取率及还原糖量的影响　Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｏｎ　ｈｔｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　０ｉｌ　ａｎｄ　ｈｔｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　注：酶解条件为ｐＨ４．５、５０℃、６　ｈ，２％加酶量，固液比１：８。　从表１可以看出，不同商品纤维素酶酶制剂对清　油提取率和酶解液中还原糖生成量影响很大，这主要　与它们的酶活力有关。玉米胚在热处理中，细胞壁微　纤丝网中填充物质如果胶、半纤维素及其它多糖物质　溶解进入溶液中，由纤维素分子聚合而成的微纤丝网　状骨架是玉米胚热处理后细胞壁的主要物质。所以，　玉米胚细胞壁的破坏与否基本取决于细胞壁纤维素　的降解程度，因此，对于不同商品酶制剂，纤维素酶活　力越高，细胞壁纤维素降解程度越大，清油提取率和　还原糖生成量越高。由表１可以看出，使用杰能科商　品纤维素酶制剂，酶解液中还原糖生成量最多，清油　提取率最高，说明杰能科商品酶制剂的纤维素酶酶活　最高，这与所测得酶活一致。３种酶制剂纤维素酶酶活　力居主导地位，杰能科纤维素酶活力最高，ＮＯＶＯ次　之，夏盛最低。　２＿３反应ｐＨ对清油提取率及还原糖量的影响　反应ｐＨ对清油提取率及还原糖量的影响见图２。　ｐＨ直接影响酶与底物的结合和催化作用，每一　生物工程　张志伟，等：水酶法提取玉米胚芽油一酶解工艺参数优化　表２几种商品酶制剂酶活（ｉｔｍｏｌ／—ｒｍｉＩ／ｎ卜‘暑一、檠　览表　Ｔａｂｌｅ　２　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅｓ　瓣　超　酶解液ｐＨ　图２反应ｐＨ对清油提取率及还原糖量的影响　Ｆｉｇ．２　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｈｔｅｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　注：酶解条件为５０　ｏＣ、６ｈ，２％纤维素酶、固液比１：８。　个酶催化反应，都有一个适宜的ｐＨ，在适宜的ｐＨ下，　酶催化效率最高。从图２可见，ｐＨ４．５～５．５为纤维素酶　作用的适宜ｐＩ－Ｉ，ｐＨ５．０时催化效率最高，此ｐＨ下，玉　米胚芽细胞破坏最为彻底，还原糖的生成量为１７．２　ｇ／Ｌ。　从图２可以看出清油提取率和还原糖的生成量随反应　ｐＨ变化不完全一致，反应ｐＨ为４．５时清油提取率最　高，这是因为清油提取率不仅与细胞的破坏程度有　关，还与蛋白质的溶解性及乳化性有关，反应ｐＨ４．５更　接近玉米胚芽蛋白质的等电点［１】，在等电点蛋白质溶　解度低，乳化性差，从而导致反应ｐＨ　４．５时清油提取　率最高。　２．４反应温度对清油提取率及还原糖量的影响　反应温度对清油提取率及还原糖量的影响见　图３。　谆　是　图３反应温度对清油提取率及还原糖量的影响　Ｆｉｇ．３　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｈｔｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆｆｒｅｅ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　注：酶解条件为ｐＨ４．５、６　ｈ，２％纤维素酶、固液比１：８。　从图３可看出，在４０℃　５０℃之间，还原糖的生　成量和清油提取率随反应温度的升高而增加，在５０℃～　６０℃之间又随反应温度的升高而逐渐下降，５０℃为酶　作用的适宜温度，此温度下，还原糖生成量和清油提　取率最高，分别为１５．６　ｇ／Ｌ、８３．０８％。各种酶催化都有　合适的温度，在酶的最适温度下，随着温度的升高，反　应物的能量增加，单位时间内分子间的有效接触次数　增加，反应速度加快，如果反应体系的温度高于酶的　最适温度，酶分子吸收过多的能量，引起维持酶分子　结构的次级键解体，导致酶蛋白变性，因此使酶活性　减弱，甚至丧失催化活力［８１。　２．５酶解时间对清油提取率及还原糖量的影响　酶解时间对清油提取率及还原糖量的影响见图４。　爨　隧　题　图４酶解时间对清油提取率及还原糖量的影响　Ｆｉｇ．４　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｔｉｍｅｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｆｒｅｅｏｉｌａｎｄｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆ　ｈｔｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｓｕｇａｒ　注：ｐＨ４．５、５０℃、２％纤维素酶、固液比１：８。　通过图４可以看出，清油提取率和还原糖在３　ｈ～　５　ｈ之间，随酶解时间的延长增加速度较快，酶解反应　５　ｈ时，清油提取率和还原糖分别为８２．６％、１５．０１　ｇ／Ｌ，　在５　ｈ　８　ｈ之间，清油提取率和还原糖的生成量增长　缓慢。酶解时间应控制在５　ｈ。　２．６酶解工艺的优化　采用响应面分析法，在单因素的基础上，固液比　为１：８，纤维素酶添加量为２％条件下，以清油提取　率为响应值，对酶解体系的ｐＨ、温度及酶作用时间进　行优化。ＲＳＡ试验的因素、水平组合和响应值结果见　表３。　表３　ＲＳＡ试验的因素、水平组合和响应值　Ｔａｂｌｅ　３　ＲＳＡ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　张志伟，等：水酶法提取玉米胚芽油一酶解工艺参数优化　生物工程　—＝＝＝１１８　续表３　ｌｔｓＡ试验的因素、水平组合和响应值　Ｃｏｎｔｉｎｕｅ　ｔａｂｌｅ　３　ＲＳＡ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　用ＳＡＳ＇ＲＳＲＥＧ计算出回归方程：　Ｙ＝８３．１０＋１．１０５ｘ１＋３．５２１ｘ２＋２．６７６ｘ３—４．９３４ｘ１　一　６．１６６Ｘ２２—９．０５ｌＸ３２—０．１９０ＸｌＸ２—２．９１ｘｌｘ３＋４．７１７　５ｘ２ｘ３。　回归方程的方差分析表见表４。　表４回归方程的方差分析表　Ｔａｂｌｅ　４　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ｏｆ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　注：　０ｌ【９，５）＝１０．２；１％０１（９，５）＝Ｏ．９７８　３。　从表４看出，该回归模型的Ｆ值为２１．６０１，大于　Ｆｎ。。（９，５），线性相关系数Ｒ为０．９８７　３，大于　。（９，５），　说明方程的因变量与全体自变量之间的线性关系　显著。　回归方程的各项方差分析如表５。　表５回归方程的各项方差分析表　Ｔａｂｌｅ　５　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｖａｒｉａｎｃｅ　ｏｆ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　注：Ｆｎ０。（３，２）＝１０．２。　由表５看出，Ｙ的一次项、二次项都是显著的，说　明响应值的变化相当复杂；交互项的显著性说明三因　素之间的相互影响较大；失拟项的显著性说明还有另　外因素在影响响应值，如固液比、搅拌速度、离心速度　等；误差不显著，说明试验误差小。　由响应面分析得最佳酶解条件为酶解反应ｐＨ为　４．５，反应温度为５１．９　ｏＣ，反应时间为５．２４　ｈ，此时所得　清油提取率为８４．１％。　３结论　研究了固液比、酶种类、反应温度、时间及ｐＨ值　对清油提取率及酶解液中还原糖量的影响。结果表明：　选用杰能科纤维素酶，固液比为１：８，反应温５０　ｃＩ：、酶　解时间５　ｈ及ｐＨ　４．５时，酶解彻底。并在此基础上，根　据ＢＯＸ中心组合设计原理，设计了三因素三水平的响　应面分析试验，结果表明：采用２％的杰能科纤维素　酶，固液比为１：８，酶解ｐＨ为４－５，酶解温度为５１．９　ｃｃ，　酶解时间为５．４２　ｈ，清油提取率为８４．１％。　参考文献：　［１】Ｎｉｌｓｅｎ　Ｈ　Ｃ，Ｉｎｇｌｅｔｔ　Ｇ　Ｅ，Ｗａｌｌ　Ｊ　Ｓ．Ｃｏｒｎ　ｇｅｒｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｓｏｌａｔｅ－ｐｒｅｌｉｍ－　ｉｎａｒｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅ￣ｉｅｓ【Ｊ】．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，１９７３，５０：　４３５—４４３　［２　ＭｃＧｌ２］ｏｎ　Ｏ　Ｃ，Ｍｕｎｇｕｉａ　Ａ　Ｌ，Ｃａｒｔｅｒ　Ｊ　Ｖ．Ｃｏｃｏｎｕｔ　ｏｉｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ａ　ｎｅｗ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌ　ｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆＦｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８６，５１：６９５　【３】Ｓｕｇａｒｍａｎ，Ｎ．Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　ｏｌｅａｇｉｎｏｕｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，１９５６，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ　２７６２８２０１１７］　【４】Ｒｏｂｅｒｔ　Ｈ，Ｃａｒｌ　Ｍ　Ｃ，Ｋａｒｌ　Ｆ　Ｍ．Ａｑｕｅｏｕｓ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｏｆ　ｆｒｅｓｈ　ｃｏｃｏｎｕｔｓ　ｆｏｒ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆｏｉｌ　ａｎｄ　ｃｏｃｏｎｕｔ　ｓｋｉｍ　ｍｉｌｋ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｆｏＦｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，　１９７３，３８：５　１６—５２２　［５　Ｒｏｂｅａ　５］Ｈ．Ａｑｕｅｏｕｓ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｏｆ　ｆｕｌｌ－ｆａｔ　ＳＵＩＬ￣ＯＷｅＹ　ｓｅｅｄｓ：ｙｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ｏｉｌ　ｎａｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ［］Ｊ．Ｊ　ＡＯＣＳ　１９７４，３９：４７０－４７６　［６】Ｇｕｎｅｔｉｌｅｋｅ　Ｋ　Ｇ，Ｆｌａｕｒｅｎｔｉｕｓ　Ｓ．Ｃｏｎｔｉｏｎ　ｏｆｒ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　ｃｏｃｏｎｕｔ　ｍｉｌｋ　ｅｍｕｌｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ　ｆｏ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７４，　３９：２３１－２３６　【７】王璋．食品酶学【Ｍ】．北京：中国轻工出版社，１９９０　［８］王璋，许时婴，汤坚．食品化学［Ｍ］．北京：中国轻工出版社，１９９６　收稿日期：２０１３—１０—２８