全蛋白提取组织裂解液配方

Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方

1. 储备液

1.1 10% Triton X-100

Triton X-100 10ml

蒸馏水 90ml

混合后37℃-40℃水浴中2-3hr，使其充分混匀

1.2 10% 去氧胆酸纳

去氧胆酸纳 1g

蒸馏水 10ml

避光保存

1.3 200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)

PMSF 174.2mg

异丙醇 5ml

分装，-20℃保存

1.4 100mmol/L EDTA

EDTA 372.24mg

蒸馏水 10ml

1.5 1mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)

亮抑酶肽 2mg

蒸馏水 2ml

分装，-20℃保存

1.6 1mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)

抑蛋白酶肽 2mg

蒸馏水 2ml

分装，-20℃保存

1.7 1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)

胃蛋白酶抑制剂 2mg

甲醇 2ml

分装，-20℃保存

2. 工作液

2.1 Tris-base (50mmol/L，pH 7.4)：

Tris-base 605mg

NaCl 900mg

蒸馏水 75ml

用HCl调整pH值为7.4

2.2 10% Triton X-100 10mL

2.3 10% 去氧胆酸纳 2.5mL

2.4 100mmol/L EDTA 1mL

2.5 用前加入：

1mg/mL亮抑酶肽 100l

1mg/mL 抑蛋白酶肽 100l

1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂 100l

200mmol/L PMSF 500l

各成分的终浓度

Tris-base 50mmol/L，pH 7.4

Triton X-100 1%

去氧胆酸纳 0.25%

NaCl 150mmol/L

EDTA 1 mmol/L

亮抑酶肽 1g/mL

抑蛋白酶肽 1g/mL

胃蛋白酶抑制剂 1g/mL

PMSF 1mmol/L