[12]发明专利申请公开说明书
[21]申请号200310124170.2
[51]Int.CI7
A61K 31/343A61K 35/78A61K 9/19A61P 9/10
[43]公开日2004年11月17日[22]申请日2003.12.15[21]申请号200310124170.2
[71]申请人张正生
地址100036北京市海淀区莲花小区2号楼4门18
01室[72]发明人张正生
[11]公开号CN 1546012A
权利要求书 2 页 说明书 8 页
[54]发明名称
一种丹参注射制剂及其制备方法
[57]摘要
本发明公开了一种丹参注射制剂及其制备方法，包括注射液，粉针剂和冻干粉针剂。其特征在于它主要由丹参酮类羟丙基β－环糊精包合物、丹参水提物组成，采用超临界流体萃取技术提取丹参中丹参酮类脂溶性成分，对丹参酮采用羟丙基β－环糊精(HP－β－CD)包合，从而大大提高了丹参酮类成分在注射液中的溶解度和含量，使丹参注射制剂的质量和临床疗效得到明显提高。本发明的丹参注射制剂，有效成分含量高，稳定性好，疗效显著。
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权 利 要 求 书
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1、一种丹参注射制剂，其特征在于其主要成分是由丹参酮类羟丙基β-环糊精包合物、丹参水溶性提取物组成。
2、根据权利要求1所述的丹参酮类羟丙基β-环糊精包合物，其特征在于采用超临界萃取提取丹参中的丹参酮，以羟丙基β-环糊精利用搅拌法进行包合。
3、根据权利要求1所述的丹参注射制剂，其主要成分的制备方法是：取丹参粗粉，置超临界流体萃取器中，萃取2h，得丹参超临界萃取物；取丹参超临界萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，恒温搅拌一定时间，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得羟丙基β-环糊精包合物粉末。取超临界萃取后的丹参粗粉，以去离子水煎煮提取三次，提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于2g的生药，放冷，缓缓加入乙醇使含醇量达75％，冷藏静置，滤过；上清液减压回收乙醇，浓缩至药液在50℃时相对密度为1.15-1.20，放冷，加入乙醇使含醇量达80-85％，冷藏静置，滤过，滤液减压回收乙醇至干，得丹参水溶性提取物，备用。将丹参酮HP-β-CD包合物以及丹参水提取物用适量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分钟，滤过，真空低温干燥和/或冷冻干燥，得丹参注射制剂的主要成分。
4、根据权利要求1所述的一种丹参注射制剂，它可以是注射液或粉针剂，粉针剂包括无菌粉针剂和冻干粉针剂。
5、根据权利要求4所述的一种丹参注射液，其特征在于取丹参
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注射制剂的主要成分，用适量注射用水溶解，加吐温-80适量，滤过，调节pH值，灌封，灭菌，即得。
6、根据权利要求4所述的冻干粉针剂，其特征在于取丹参注射制剂的主要成分，用适量注射用水溶解，加适量冻干赋形剂，混匀，滤过，调节pH值，灌装，冷冻干燥，压盖，即得。
7、根据权利要求6所述的冻干粉针剂，其特征在于冻干赋形剂可以是甘露醇和乳糖中一种或二种的混合物。
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说 明 书
一种丹参注射制剂及其制备方法
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所属技术领域
本发明属中药制药领域，具体涉及一种丹参注射制剂的主要成分及其注射制剂的制备方法。 背景技术
冠心病、心绞痛在临床上是常见病、多发病，近年来随着人们生活水平的提高，发病率呈逐年上升的趋势。丹参是传统的活血化瘀常用中药，临床上用于治疗心绞痛、心肌梗塞等心血管系统疾病有很好的效果。现代药理研究表明，丹参的药理作用主要是对心血管系统，能扩张血管，加快血流，改善微循环，改变血液粘滞性，增加心肌供血量、供氧量、降低心肌耗氧量等。此外，丹参还具抗肿瘤、抗菌、抗炎等作用。因此，丹参的应用十分广泛。药理研究表明，丹参中具有活血化瘀活性的有效部位有两类：脂溶性丹参酮类和水溶性丹参酚酸类。脂溶性丹参酮类：包括丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I、去氢丹参酮I等成分。药理研究表明丹参酮IIA具有抗血小板聚集作用、抗血栓作用和对实验性心肌缺血和再灌注损伤具有保护作用。丹参酮IIA磺酸钠能通过钙拮抗作用减少或抑制异丙基肾上腺素引起的心肌线粒体钙超载，从而起到保护线粒体和心肌细胞因遭受高钙冲击而致细胞坏死作用，并能促进缺血心肌ATP的合成。水溶性丹参酚酸类：包括丹酚酸A～C、迷迭香酸及其甲酯、丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等成分。药理研究表明丹参酚酸类成分具有抗血小板聚集作用、抗血栓形成作用、改善微循环作用、抗氧化损伤和多途径发挥心肌保护作用。
目前，丹参注射液采用水煮醇沉工艺(部颁标准WS3-B-3766-98)，由于脂溶性成分在水中溶解度小或几乎不溶，所以采用水提醇沉工艺脂溶性成分大部分未被提出或提出很少，并且注射液稳定性较差，贮存一定时间后往往出现pH值改变，外观色泽变深，甚至出现浑浊和沉淀等，使澄明度不合格，因此，丹参注射液的工艺亟需改进与提高。
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超临界流体萃取是一种新型萃取分离技术，它能够比较完好地保存中药有效成分不被破坏或发生次生化，尤其适合于对热敏感性强、容易氧化分解的中药成分的提取。超临界二氧化碳流体萃取提取效率高，在有效成分得到富集的同时，无溶剂残留，便于控制产品质量。因此，采用超临界流体萃取技术对丹参中的脂溶性丹参酮类成分进行提取，可防止对热不稳定的丹参酮降解，并且具有萃取完全的优点。 环糊精以其特殊的“内疏水、外亲水”的分子结构与许多客体分子形成包结配合物，在药学上主要用于提高药物在制剂中的稳定性，增加难溶性药物在水中的溶解度等，但β-环糊精(β-CD)本身的低溶解度限制了它的应用，在众多的环糊精衍生物中羟丙基β环糊精(HP-β-CD)衍生物被认为是最有前途的高级药物载体材料。HP-β
-CD在水中的溶解度75％，远远大于β-CD1.85％(25℃)，比β-CD的水溶解度提高近40倍。难溶性药物被HP-β-CD包合后，不仅能增加
药物的溶解度和溶解速度，还可以提高药物生物利用度和稳定性。动物实验表明，HP-β-CD本身安全性好，无毒副作用，并且HP-β-CD已被美国药典作为药用辅料收载。因此，采用HP-β-CD包合丹参注
射制剂中丹参酮类成分，能很好解决丹参酮类脂溶性成分在注射液中溶解度小的问题。
结合丹参注射制剂中丹参酮不稳定，容易发生降解以及丹参酮
在水中溶解度小的特点，本发明采用超临界流体萃取法提取丹参中的脂溶性丹参酮类成分，将丹参酮采用羟丙基β-环糊精包合，对超临界萃取后的丹参采用水提，与丹参酮类羟丙基β-环糊精包合物一起制成注射制剂。专利CN99117379公开了中药丹参中活性成分超临界
二氧化碳萃取工艺方法，采用夹带剂提取丹参酮，这样易提取出极性较大的成分，而本发明的目的是提取出脂溶性丹参酮类成分供HP-β-CD包合，解决脂溶性成分难溶于水的问题。专利CN01141436.7报
道了水溶性丹参酮的制备方法，采用乙醇提取丹参，然后直接用β-环糊精包合，因采用乙醇提取出的成分较多，除有丹参酮类成分外，水溶性成分如丹参素、原儿茶醛等也会被乙醇提出，这样直接用β-5
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环糊精包合，没有针对性，并且包合所需β-环糊精量较大，包合效果也不理想。本发明采用超临界萃取提取出丹参酮类脂溶性成分，采用HP-β-CD有针对性地进行包合，并且采用HP-β-CD包合比采用β-CD包合好，其水溶性得到大大提高，提高约40倍。采用超临界流体技术提取丹参中的丹参酮类成分并对其采用羟丙基β-环糊精包
合，增加了其稳定性和水溶性；因此，通过本发明，解决了丹参酮在注射液中溶解度小、含量少、不稳定的问题，使制剂更稳定，有效成分含量大大提高，从而使制剂成品的质量和临床疗效得到保证。 发明内容
本发明的目的在于提供一种有效成分含量高、稳定、制备工艺合理的丹参注射制剂及其制备方法。本发明采用二氧化碳超临界流体萃取技术提取丹参中的丹参酮类有效成分，利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对其进行包合，从而增进了丹参酮类成分在注射液中的溶解
度，解决了脂溶性成分在注射液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。对超临界流体萃取后的丹参药材粉加水煎煮提取，水提液浓缩后，醇沉纯化二次，浓缩至适量，加入丹参酮HP-β-CD包合
物，搅拌均匀，用0.2％的活性炭脱色，滤过，低温真空干燥或冷冻干燥，即得丹参注射制剂的主要成分。取丹参注射制剂的主要成分，加注射用水使溶解，加吐温-80适量，调节pH值，滤过，灌装，灭
菌，即得丹参注射液；取丹参注射制剂的主要成分，加适量注射用水溶解，加入适量冻干赋形剂，冷冻干燥，即得丹参冻干粉针剂。本发明的丹参注射制剂，有效成分含量高，疗效显著。 本发明通过以下技术方案实现： 一、药材的前处理
取丹参药材，拣选、用去离子水洗净、烘干，粉碎成粗粉。 二、提取、制备工艺
1、取丹参粗粉，置超临界流体萃取器中，萃取2h，得丹参超
临界萃取物；取丹参超临界萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的
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HP-β-CD溶液中，恒温搅拌一定时间，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得HP-β-CD包合物粉末。取超临界萃取后的丹参粗粉，以去离子水煎煮提取三次，提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于
2g的生药，放冷，缓缓加入乙醇使含醇量达75％，冷藏静置，滤过；上清液减压回收乙醇，浓缩至药液相对密度为1.15-1.20(50℃)，放冷，加入乙醇使含醇量达80-85％，冷藏静置，滤过，滤液减压回收乙醇至干，得丹参水提取物，备用。将丹参酮HP-β-CD包合物以及
丹参水提取物用适量注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分钟，滤过，真空低温干燥和/或冷冻干燥，得丹参注射制剂的主要成分。 取丹参注射制剂的主要成分，用适量注射用水溶解，加入吐温-80适量，滤过，调节pH值，滤过，灌封，灭菌，即得丹参注射液。
取丹参注射制剂的主要成分，加适量注射用水溶解，加入适量冻干赋形剂，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，灌装，冷冻干燥，即得注射用丹参冻干粉针。
2、丹参注射制剂主要由丹参酮类羟丙基β-环糊精包合物、丹参水溶性有效成分组成。
3、丹参酮类羟丙基β-环糊精包合物采用超临界萃取技术提取丹参中的丹参酮类成分，以羟丙基β-环糊精利用搅拌法进行包合。
4、一种丹参注射用冻干粉针，其冻干赋形剂可以是甘露醇和乳糖中的一种或二种的混合物。
丹参注射制剂对大鼠急性心肌缺血的影响 1、实验仪器与材料
动物：Wistar大白鼠；垂体后叶素注射液，北京生化制药厂生产。
2、方法与结果
2.1 丹参注射制剂对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响：取体重250～300g Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，连续ip给药7d，剂量见表1。各组动物于末次给药
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30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化，从表1丹参注射液与本发明的丹参注射制剂对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。
T波增值(mV) 组别 动物数 剂量
30s 1min 5min 生理盐水组 10 0.6ml 0.35±0.12 0.25±0.16 0.18±0.022 丹参注射液组 10 0.6ml/kg 0.26±0.06* 0.15±0.041* 0.098±0.015* 本发明的丹参
10 0.6ml/kg 0.19±0.05** 0.10±0.034** 0.052±0.011** 注射液组
维拉帕米 10 5mg/kg 0.16±0.020** 0.08±0.032** 0.030±0.018** 与生理盐水组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
从以上结果可看出，本发明的丹参注射液能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖，比普通丹参注射液效果更明显。 具体实施形式 实施例1
1、处方 丹参1500g
2、提取：取上述处方量药材，拣选、用去离子水洗净、烘干，粉碎成粗粉。取丹参粗粉，置超临界流体萃取器中，以22Mpa的萃取压力，45℃的萃取温度萃取2小时，得丹参超临界萃取物。取丹参超临界萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，50
℃恒温搅拌至出现浑浊，继续搅拌1.5h，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超临界萃取后的丹参药粉，以去离子水煎煮提取三次，提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于2
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的生药，缓缓加入乙醇使含醇量达75％，冷藏静置，滤过；上清液减压回收乙醇，浓缩至药液相对密度为1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量达85％，冷藏静置，滤过，滤液减压回收乙醇至干，得丹参水提取物，备用。将丹参酮HP-β-CD包合物与丹参水提取物用适量注
射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分钟，滤过，真空低温干燥和/或冷冻干燥，得丹参注射制剂的主要成分。 3、制备
(1)丹参注射液的制备：取丹参注射制剂的主要成分，用适量注射用水溶解，再加入吐温-80适量，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得丹参注射液。 (2)丹参冻干粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，加
适量注射用水溶解，加入冻干赋形剂甘露醇30g，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，灭菌，冷冻干燥，即得注射用丹参冻干粉针剂。 (3)丹参无菌粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，无菌分装，即得。 实施例2
1、处方 丹参1500g
2、提取：取上述处方量药材，拣选、用去离子水洗净、烘干，粉碎成粗粉。取丹参粗粉，置超临界流体萃取器中，以22Mpa的萃取压力，45℃的萃取温度萃取2小时，得丹参超临界萃取物。取丹参超临界萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，50
℃恒温搅拌至出现浑浊，继续搅拌1.5h，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超临界萃取后的丹参药粉，以去离子水煎煮提取三次，提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于
2g的生药，缓缓加入乙醇使含醇量达75％，冷藏静置，滤过；上清液减压回收乙醇，浓缩至药液相对密度为1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量达85％，冷藏静置，滤过，滤液减压回收乙醇至干，得丹参水提取物，备用。将丹参酮HP-β-CD包合物与丹参水提取物用适量
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注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分钟，滤过，真空低温干燥和/或冷冻干燥，得丹参注射制剂的主要成分。 3、制备
(1)丹参注射液的制备：取丹参注射制剂的主要成分，用适量注射用水溶解，再加入吐温-80适量，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得丹参注射液。 (2)丹参冻干粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，加适量注射用水溶解，加入冻干赋形剂甘露醇20g，乳糖10g，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，灭菌，冷冻干燥，即得注射用丹参冻干粉针剂。
(3)丹参无菌粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，无菌分装，即得。 实施例3
1、处方 丹参1500g
2、提取：取上述处方量药材，拣选、用去离子水洗净、烘干，粉碎成粗粉。取丹参粗粉，置超临界流体萃取器中，以22Mpa的萃取压力，45℃的萃取温度萃取2小时，得丹参超临界萃取物。取丹参超临界萃取物，用适量乙醇溶解，加入到饱和的HP-β-CD溶液中，50
℃恒温搅拌至出现浑浊，继续搅拌1.5h，置冰箱中冷藏过夜，抽滤，低温干燥，得HP-β-CD包合物粉末；取超临界萃取后的丹参药粉，以去离子水煎煮提取三次，提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于
2g的生药，缓缓加入乙醇使含醇量达75％，冷藏静置，滤过；上清液减压回收乙醇，浓缩至药液相对密度为1.15-1.20(50℃)，加入乙醇使含醇量达85％，冷藏静置，滤过，滤液减压回收乙醇至干，得丹参水提取物，备用。将丹参酮HP-β-CD包合物与丹参水提取物用适量
注射用水溶解，以0.2％的活性炭煮沸30分钟，滤过，真空低温干燥和/或冷冻干燥，得丹参注射制剂的主要成分。 3、制备
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(1)丹参注射液的制备：取丹参注射制剂的主要成分，用适量
注射用水溶解，再加入吐温80适量，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得丹参注射液。
(2)丹参冻干粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，加
适量注射用水溶解，加入冻干赋形剂乳糖40g，搅匀，滤过，调节pH值，滤过，灭菌，冷冻干燥，即得注射用丹参冻干粉针剂。 (3)丹参无菌粉针剂的制备：取丹参注射制剂的主要成分，无菌分装，即得。
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