(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 107189966 A(43)申请公布日 2017.09.22
(21)申请号 201710571579.0(22)申请日 2017.07.13
(71)申请人 漳州傲农牧业科技有限公司
地址 363000 福建省漳州市芗城区石亭镇
吴门村横官路
申请人 金华傲农生物科技有限公司
北京慧农生物科技有限公司(72)发明人 赖水明 黄静 王丽娜 邓红玉
吴有林 张敬学 刘小成 李兵 汤建平 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理
事务所(普通合伙) 11371
代理人 齐海迪(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
权利要求书1页 说明书9页
C12N 1/04(2006.01)A23K 10/18(2016.01)C12R 1/07(2006.01)C12R 1/23(2006.01)C12R 1/25(2006.01)C12R 1/01(2006.01)
CN 107189966 A(54)发明名称
一种微生态制剂及其制备方法(57)摘要
一种微生态制剂及其制备方法，属于饲料技术领域。微生态制剂包括按质量比为45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢杆菌菌粉和低聚糖，乳酸菌菌粉的活菌数≥1×1011CFU/g，芽孢杆菌菌粉的活菌数≥5×1010CFU/g。该微生态制剂具有活菌含量高，富含生物活性物质与多种低聚糖益生元的优点。本发明还提供了该微生态制剂的制备方法，包括分别将乳酸菌和芽孢杆菌培养得到乳酸菌泥和芽孢杆菌泥后，分别与冻干保护剂按1：3～4的质量比混合，并在-50～-60℃下冷冻2.5～3h后真空干燥得到乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉后混合，并加入低聚糖混合均匀。该制备方法工艺简单，操作方便且成本低廉。
CN 107189966 A
权 利 要 求 书
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1.一种微生态制剂，其特征在于，其包括按质量比为45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢杆菌菌粉和低聚糖；其中所述乳酸菌菌粉的活菌数≥1×1011CFU/g，所述芽孢杆菌菌粉的活菌数≥5×1010CFU/g。
2.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于，所述低聚糖包括果寡糖、异麦芽低聚糖和低聚木糖中的至少一种。
3.一种如权利要求1所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：分别将乳酸菌和芽孢杆菌培养得到乳酸菌泥和芽孢杆菌泥，将所述乳酸菌泥和所述芽孢杆菌泥分别与冻干保护剂按1：3～4的质量比混合，并在-50～-60℃下冷冻后真空干燥得到乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉；将所述乳酸菌冻干粉和所述芽孢杆菌冻干粉混合。
4.根据权利要求3所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，以质量百分比计，所述冻干保护剂包括15～18％的脱脂奶粉、1～2％的水苏糖、0.1～0.5％的谷氨酸钠及0.5～1％的乳糖，余量为质量分数为0.5％的甘油的水溶液。
5.根据权利要求3所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌冻干粉和所述芽孢杆菌冻干粉按照80～100：1的活菌数比混合。
6.根据权利要求3所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，向混合后的所述乳酸菌冻干粉和所述芽孢杆菌冻干粉中加入低聚糖混合均匀，使活菌数达到1×1010～2×1010CFU/g。
7.根据权利要求3所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌中的至少一种，所述乳酸菌的培养方法是：将选取的乳酸菌分别接种于乳酸菌液体培养基上培养并混合得到第一培养液，将所述第一培养液按0.3～0.4％的体积接种量接种于乳酸菌增菌培养基中培养28～32h后离心，得到乳酸菌泥。
8.根据权利要求7所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10g/L，牛肉膏7.0～8.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，葡萄糖15.0～16.0g/L，乙酸钠4.0～5.0g/L，柠檬酸二铵1.0～2.0g/L，Tween 801.0～1.5g/L，K2HPO41.0～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.4～0.6g/L，MnSO4·H2O0.2～0.4g/L。
9.根据权利要求3所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的至少一种，所述芽孢杆菌的培养方法是：将选取的芽孢杆菌分别接种于芽孢杆菌液体培养基上培养并混合得到第二培养液，将所述第二培养液按0.4～0.5％的体积接种量接种于芽孢杆菌增菌培养基中培养20～24h后离心，得到芽孢杆菌泥。
10.根据权利要求9所述的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述芽孢杆菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，NaCl4.0～5.0g/L，CaCO31.5～2.0g/L，MnSO4·H2O0.005～0.010g/L。
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说 明 书
一种微生态制剂及其制备方法
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技术领域
[0001]本发明涉及饲料技术领域，且特别涉及一种微生态制剂及其制备方法。
背景技术
[0002]近年来随着人们对食品安全意识的不断加强，无污染无残留的“绿色食品”成为了消费者热衷和推崇的商品。为了解决抗生素饲料添加剂应用的问题，各种抗生素替代品的研究已经成为全球食品生产企业的研究热点，主要包括化学益生素、益生素、酶制剂、中草药等无污染的添加剂。
[0003]益生素又称活菌制剂，其是在微生态学理论的指导下，将从动物体内分离出的有益微生物经过特殊工艺制成的有益活体微生物制剂，其具有无毒副作用、无耐药性、无残留、成本低、效果显著、不污染环境等特点。目前常用的微生物制剂主要包括乳酸菌制剂，芽孢杆菌制剂以及真菌、活酵母类制剂。微生态制剂能够通过促进动物胃肠道正常微生物区系的建立来增强畜禽的免疫力，减少疾病的发生，增强畜禽的生长速度，是一种能够代替抗生素使用的绿色饲料添加剂。但是目前国内微生态制剂的应用主要以芽孢杆菌为主，乳酸菌由于保存问题难以解决一直没能得到推广使用。[0004]因此，需要一种以乳酸菌为主要原料制备得到的微生态饲料添加制剂。发明内容
[0005]本发明的另一目的在于提供一种微生态制剂，其具有活菌含量高，溶解性好的优点，并富含生物活性物质与多种低聚糖益生元。
[0006]本发明的另一目的在于提供上述微生态制剂的制备方法，该方法具有工艺简单，操作方便，成本低的优点。
[0007]本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。[0008]一种微生态制剂，其包括按质量比为45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢杆菌菌粉和低聚糖；其中乳酸菌菌粉的活菌数≥1×1011CFU/g，芽孢杆菌菌粉的活菌数≥5×1010CFU/g。[0009]进一步地，在本发明较佳实施例中，低聚糖包括果寡糖、异麦芽低聚糖和低聚木糖中的至少一种。
[0010]本发明还提供了上述微生态制剂的制备方法，其包括以下步骤：分别将乳酸菌和芽孢杆菌培养得到乳酸菌泥和芽孢杆菌泥，将乳酸菌泥和芽孢杆菌泥分别与冻干保护剂按1：3～4的质量比混合，并在-50～-60℃下冷冻后真空干燥得到乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉；将乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉混合。[0011]进一步地，在本发明较佳实施例中，以质量百分比计，冻干保护剂包括15～18％的脱脂奶粉、1～2％的水苏糖、0.1～0.5％的谷氨酸钠及0.5～1％的乳糖，余量为质量分数为0.5％的甘油的水溶液。[0012]进一步地，在本发明较佳实施例中，乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉按照80～
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100：1的活菌数比混合。[0013]进一步地，在本发明较佳实施例中，向混合后的乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉中加入低聚糖混合均匀，使活菌数达到1×1010～2×1010CFU/g。[0014]进一步地，在本发明较佳实施例中，乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌中的至少一种，乳酸菌的培养方法是：将选取的乳酸菌分别接种于乳酸菌液体培养基上培养并混合得到第一培养液，将第一培养液按0.3～0.4％的体积接种量接种于乳酸菌增菌培养基中培养28～32h后离心，得到乳酸菌泥。[0015]进一步地，在本发明较佳实施例中，乳酸菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10g/L，牛肉膏7.0～8.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，葡萄糖15.0～16.0g/L，乙酸钠4.0～5.0g/L，柠檬酸二铵1.0～2.0g/L，Tween 801.0～1.5g/L，K2HPO41.0～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.4～0.6g/L，MnSO4·H2O0.2～0.4g/L。[0016]进一步地，在本发明较佳实施例中，芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的至少一种，芽孢杆菌的培养方法是：将选取的芽孢杆菌分别接种于芽孢杆菌液体培养基上培养并混合得到第二培养液，将第二培养液按0.4～0.5％的体积接种量接种于芽孢杆菌增菌培养基中培养20～24h后离心，得到芽孢杆菌泥。[0017]进一步地，在本发明较佳实施例中，芽孢杆菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，NaCl4.0～5.0g/L，CaCO31.5～2.0g/L，MnSO4·H2O0.005～0.010g/L。
[0018]本发明实施例的微生态制剂与制备方法的有益效果是：本发明提供的微生态制剂及其制备方法，该方法工艺简单，操作方便，成本低廉，适合大规模生产微生态制剂。该微生态制剂将多种乳酸菌、芽孢杆菌与低聚糖混合复配后得到粉剂产品，能够有效的避免生产过程中菌种在低温干燥下死亡，从而得到活菌数高达1010CFU/g的微生态制剂，且微生态制剂中含有的低聚糖具有稳定性好、耐热耐酸、抗霉菌和低吸湿性的优点，并能促进畜禽肠胃中的双歧杆菌繁殖，从而配合生物活性物质改善畜禽的肠胃功能。该微生态制剂可用于预防或治疗动物腹泻、提高动物免疫力、提高动物抗应激能力、增强动物消化功能或促进动物生长。
具体实施方式
[0019]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0020]下面对本发明实施例的微生态制剂与制备方法及冻干保护剂进行具体说明。[0021]本发明实施例提供了一种冻干保护剂，以质量百分比计，其包括15～18％的脱脂奶粉、1～2％的水苏糖、0.1～0.5％的谷氨酸钠及0.5～1％的乳糖，余量为质量分数为0.5％的甘油的水溶液。
[0022]本发明实施例提供的冻干保护剂采用甘油的水溶液作为载体，并加入适当的脱脂奶粉、水苏糖、谷氨酸钠及乳糖进行配合，能够在低温干燥时对微生态菌种进行保护，降低菌种低温干燥时的失活率，提高产品的活菌数。其中，甘油能够在冻结和干燥过程中防止活
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性组分产生变性；乳糖和水苏糖能够起到报水作用和成形作用，避免水分和有效成分快速流失；谷氨酸钠能够调节溶液的pH变化，避免速冻过程中pH变化产生影响；脱脂奶粉作为缓冲剂能够避免溶液中的蛋白质变性失活，其含有的蛋白质直径在1nm～2nm之间，脱脂奶粉的水溶液形成的胶体溶液能够对菌体进行保护，由于蛋白质分子比细菌小得多，所以细菌颗粒处于蛋白质分子的包围之中，既可阻止菌体聚合，又有利于菌体吸收和转化蛋白质，保持细菌活性。
[0023]本发明实施例还提供了一种微生态制剂的制备方法，其包括以下步骤：[0024]S1、分别将乳酸菌和芽孢杆菌培养得到乳酸菌泥和芽孢杆菌泥；[0025]其中，乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌中的至少一种，乳酸菌的培养方法是：将选取的乳酸菌分别接种于乳酸菌固体培养基上，并在36～38℃下培养36～48h得到培养菌种，将每个培养菌种分别接种2环于乳酸菌液体培养基装载量达到800mL的1000mL三角瓶中，并在36～38℃下培养32～36h后等体积混合得到第一培养液，将第一培养液按0.3～0.4％的体积接种量接种于乳酸菌增菌培养基中于36～38℃下培养28～32h，并于3000～3500r/min下离心6～8min，得到乳酸菌泥。[0026]乳酸菌固体培养基包含：蛋白胨8.0～10.0g/L，牛肉膏8.0～10.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，葡萄糖15.0～20.0g/L，乙酸钠4.0～5.0g/L，柠檬酸二铵1.0～2.0g/L，Tween 800.5～1.0g/L，K2HPO41.0～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.4～0.6g/L，MnSO4·H2O0.2～0.4g/L，琼脂15.0～18.0g/L，乳酸菌固体培养基的pH为6.8，且在121℃下高压灭菌20min后使用。其中，乳酸菌固体培养基与乳酸菌液体培养基的区别在于乳酸菌液体培养基中不包含琼脂。[0027]乳酸菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10g/L，牛肉膏7.0～8.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，葡萄糖15.0～16.0g/L，乙酸钠4.0～5.0g/L，柠檬酸二铵1.0～2.0g/L，Tween 801.0～1.5g/L，K2HPO41.0～2.0g/L，MgSO4·7H2O0.4～0.6g/L，MnSO4·H2O0.2～0.4g/L，乳酸菌增菌培养基的pH为6.8～7.0，且在121℃下高压灭菌20min后使用。[0028]其中，芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的至少一种，芽孢杆菌的培养方法是：将选取的芽孢杆菌分别接种于芽孢杆菌固体培养基上，并在36～38℃下培养18～24h得到培养菌种，将每个培养菌种均接种2环于芽孢杆菌液体培养基装载量为200mL的1000mL三角瓶中，每个培养菌种均制作1～5瓶，置于摇床中于150～200r/min和36～38℃培养18～24h后等体积混合得到第二培养液，将第二培养液按0.4～0.5％的体积接种量接种于装载芽孢杆菌增菌培养基中于36～38℃下培养20～24h，并于3000～3500r/min下离心6～8min，得到芽孢杆菌泥。
[0029]芽孢杆菌固体培养基包括：蛋白胨9.0～10.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，NaCl4.0～5.0g/L，琼脂12.0～15.0g/L。芽孢杆菌固体培养基的pH为7.0，并于121℃下高压灭菌20分钟后使用。其中，芽孢杆菌固体培养基与芽孢杆菌液体培养基的区别在于芽孢杆菌液体培养基中不包含琼脂。
[0030]芽孢杆菌增菌培养基包括蛋白胨9.0～10.0g/L，酵母粉4.0～5.0g/L，NaCl4.0～5.0g/L，CaCO31.5～2.0g/L，MnSO4·H2O0.005～0.010g/L，芽孢杆菌增菌培养基的pH为7.0，并于121℃下高压灭菌20分钟后使用。[0031]S2、将乳酸菌泥和芽孢杆菌泥分别与冻干保护剂按1：3～4的质量比混合，并在-50～-60℃下冷冻2.5～3h后真空干燥得到乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉；
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S3、将乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉混合，并加入低聚糖混合均匀。优选的，将
乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉按照80～100：1的活菌数比混合，并加入低聚糖混合使活菌数达到1×1010～2×1010CFU/g，其中低聚糖优选采用果寡糖、异麦芽低聚糖和低聚木糖中的至少一种。
[0033]本发明实施例提供的微生态制剂的制备方法分别使用乳酸菌固体培养基和乳酸菌增菌培养基培养嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌中的至少一种得到乳酸菌泥，并使用芽孢杆菌固体培养基和芽孢杆菌增菌培养基培养枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌中的至少一种，得到芽孢杆菌泥，将乳酸菌泥和芽孢杆菌泥分别与冻干保护剂按1：3～4的质量比混合，并在-50～-60℃下冷冻2.5～3h后真空干燥得到乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉，并将乳酸菌冻干粉和芽孢杆菌冻干粉按照比例混合后加入果寡糖、异麦芽低聚糖和低聚木糖中的至少一种组成的低聚糖，得到活菌数达到1×1010～2×1010CFU/g的微生态制剂成品，且微生态制剂成品中乳酸菌和芽孢杆菌的活菌数之比为80～100：1。该微生态制剂的制备方法能够将多种乳酸菌、芽孢杆菌分别发酵培养得到菌泥，并使用冻干保护剂保护后经低温冷冻干燥，复配混合低聚糖后得到粉剂产品，能够有效的避免菌种在低温干燥下死亡，从而得到活菌数高达1010CFU/g的微生态制剂，且微生态制剂中含有的低聚糖具有稳定性好、耐热耐酸、抗霉菌和低吸湿性的优点，并能促进畜禽肠胃中的双歧杆菌繁殖，从而配合生物活性物质改善畜禽的肠胃功能。该微生态制剂制备方法工艺简单可靠，操作方便，方便进行大规模生产且生产成本低。
[0034]本发明还提供了使用上述微生态制剂的制备方法制备得到的微生态制剂，其包括按质量比为45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢杆菌菌粉和低聚糖；其中乳酸菌菌粉的活菌数≥1×1011CFU/g，芽孢杆菌菌粉的活菌数≥5×1010CFU/g。该微生态制剂富含生物活性物质与多种低聚糖益生元，且其溶解性良好，可以渗入到饲料中使用，还可以直接溶解在水中使用，提高了畜禽的摄入率。
[0035]本发明还提供了上述微生态制剂的应用，其用于制备饲料添加剂或饲料，特别是用于预防或治疗动物腹泻、提高动物免疫力、提高动物抗应激能力、增强动物消化功能或促进动物生长的饲料添加剂或饲料。本发明实施例提供的微生态制剂通过改善动物的肠道微生态菌群的活性来减少腹泻带来的应激、通过提高动物的免疫力来抵抗各种疾病所带来的应激、通过微生态制剂的酸味具有的诱食性与适口性来减少由于换料带来的应激，在多方面配合的条件下改善动物的肠胃消化功能，提高动物的免疫力和抗应激能管理，促进动物生长。
[0036]以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
[0037]本实施例提供的乳酸菌和芽孢杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，其中，植物乳杆菌(保藏编号CICC 22703)、嗜酸乳杆菌(保藏编号CICC 22150)、乳酸乳球菌(保藏编号CICC 23609)、枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21095)、枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21164)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 20684)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 21738)。
[0038]实施例1
[0039]本实施例提供了一种微生态制剂的制备方法，其包括以下步骤：[0040]S110、将植物乳杆菌(保藏编号CICC 22703)、嗜酸乳杆菌(保藏编号CICC 22150)、
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乳酸乳球菌(保藏编号CICC 23609)菌种分别接种于乳酸菌固体培养基上，在37℃下培养40h，分别挑取各菌种2环接种于乳酸菌液体培养基装载量为800mL的1000mL三角瓶中，在37℃下培养35h得到第一培养液。乳酸菌固体培养基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母粉5.0g/L，葡萄糖20.0g/L，乙酸钠5.0g/L，柠檬酸二铵2.0g/L，Tween 801.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O0.6g/L，MnSO4·H2O0.2g/L，琼脂18.0g/L，其pH为6.8，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。乳酸菌固体培养基与乳酸菌液体培养基的区别在于乳酸菌液体培养基中不包含琼脂。[0041]S120、将S110得到的各个第一培养液混合后，按照0.4％的体积接种量接种于乳酸菌增菌培养基装载量为60％的1吨厌氧发酵罐中，在37℃增菌培养32h后，在3500r/min下离心处理5min，获得乳酸菌菌泥，收集乳酸菌菌泥，将冻干保护剂与乳酸菌菌泥按体积比为4：1的比例混合，在-60℃速冻4小时，随后放入冷冻干燥机中冻干32h收集得到乳酸菌冻干菌粉。乳酸菌增菌培养基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏8.0g/L，酵母粉5.0g/L，葡萄糖15.0g/L，乙酸钠5.0g/L，柠檬酸二铵2.0g/L，Tween 801.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O0.4g/L，MnSO4·H2O0.2g/L，其pH为6.8～7.0，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。冻干保护剂包括，以质量百分比计，包括18％的脱脂奶粉、1.5％的水苏糖、0.3％的谷氨酸钠、1％的乳糖，其余的为质量浓度0.5％的甘油的水溶液。[0042]S130、将枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21095)、枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21164)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 20684)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 21738)菌种分别接种于芽孢杆菌固体培养基上，在37℃下培养24h，各菌种均挑取2环接种于芽孢杆菌液体培养基装载量为200mL的1000mL三角瓶中，每株菌做5瓶，放入摇床中在200r/min下37℃培养24h得到第二培养液。芽孢杆菌固体培养基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/L，酵母粉5.0g/L，NaCl5.0g/L，琼脂15.0g/L，其pH为7.0，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。芽孢杆菌固体培养基与芽孢杆菌液体培养基的区别在于芽孢杆菌液体培养基中不包含琼脂。[0043]S140、将S130得到的全部第二培养液混合后，按照0.5％的体积接种量接种于芽孢杆菌增菌培养基装载量为60％的1吨发酵罐中，在37℃下培养20h，并在3500r/min下离心处理5min，获得芽孢杆菌菌泥，将冻干保护剂与芽孢杆菌菌泥按体积比为4：1的比例混合，并在-60℃速冻3小时，放入冷冻干燥机中冻干32小时收集得到芽孢杆菌冻干菌粉。芽孢杆菌增菌培养基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/L，酵母粉5.0g/L，NaCl5.0g/L，CaCO32.0g/L，MnSO4·H2O0.005g/L，其pH为7.0，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。[0044]S150、将S120获得的乳酸菌冻干菌粉与S140获得的芽孢杆菌冻干菌粉按活菌量比100：1的比例混合，再与低聚糖混合，使活菌数达到1×1010CFU/g，再按照100g/袋进行真空包装。
[0045]经检测，本发明制备得到的微生态制剂中嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌的总菌数≥9.9×109CFU/g，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的总菌数≥108CFU/g。[0046]实施例2
[0047]本实施例提供了一种微生态制剂的制备方法，其包括以下步骤：[0048]S210、将植物乳杆菌(保藏编号CICC 22703)、嗜酸乳杆菌(保藏编号CICC 22150)、乳酸乳球菌(保藏编号CICC 23609)菌种分别接种于乳酸菌固体培养基上，在36℃下培养48h，分别挑取各菌种2环接种于乳酸菌液体培养基装载量为800mL的1000mL三角瓶中，在36
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℃下培养32h得到第一培养液。乳酸菌固体培养基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/L，牛肉膏9.0g/L，酵母粉4.5g/L，葡萄糖18.0g/L，乙酸钠4.0g/L，柠檬酸二铵1.5g/L，Tween 801.0g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O0.6g/L，MnSO4·H2O0.4g/L，琼脂15.0g/L，其pH为6.8，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。[0049]S220、将S210得到的各个第一培养液混合后，按照0.3％的体积接种量接种于乳酸菌增菌培养基装载量为60％的1吨厌氧发酵罐中，在37℃增菌培养30h后，在3500r/min下离心处理8min，获得乳酸菌菌泥，收集乳酸菌菌泥，将冻干保护剂与乳酸菌菌泥按体积比为3：1的比例混合，在-55℃速冻4小时，随后放入冷冻干燥机中冻干32h收集得到乳酸菌冻干菌粉。乳酸菌增菌培养基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/L，牛肉膏8.0g/L，酵母粉5.0g/L，葡萄糖16.0g/L，乙酸钠4.5g/L，柠檬酸二铵1.5g/L，Tween 800.8g/L，K2HPO42.0g/L，MgSO4·7H2O0.6g/L，MnSO4·H2O0.4g/L，其pH为6.8，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。冻干保护剂包括，以质量百分比计，包括18％的脱脂奶粉、1.5％的水苏糖、0.3％的谷氨酸钠、1％的乳糖，其余的为质量浓度0.5％的甘油的水溶液。[0050]S230、将枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21095)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 20684)、枯草芽孢杆菌(保藏编号CICC 21164)、地衣芽孢杆菌(保藏编号CICC 21738)菌种分别接种于芽孢杆菌固体培养基上，在37℃下培养18h，各菌种均挑取2环接种于芽孢杆菌固体培养基装载量为150mL的1000mL三角瓶中，每株菌做3瓶，放入摇床中在180r/min下37℃培养20h得到第二培养液。芽孢杆菌固体培养基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g，酵母粉5.0g，NaCl4.5g，琼脂15.0g，并使用蒸馏水定容至1.0L，其pH为7.0，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。[0051]S240、将S230得到的全部第二培养液混合后，按照0.5％的体积接种量接种于芽孢杆菌增菌培养基装载量为60％的1吨发酵罐中，在37℃下培养20h，并在3500r/min下离心处理8min，获得芽孢杆菌菌泥，将冻干保护剂与芽孢杆菌菌泥按体积比为3：1的比例混合，并在-60℃速冻3小时，放入冷冻干燥机中冻干32小时收集得到芽孢杆菌冻干菌粉。芽孢杆菌增菌培养基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/L，酵母粉4.5g/L，NaCl4.5g/L，CaCO31.8g/L，MnSO4·H2O0.01g/L，其pH为7.0，配置后于121℃下高压处理20min灭菌。[0052]S250、将S220获得的乳酸菌冻干菌粉与S240获得的芽孢杆菌冻干菌粉按活菌量比100：1的比例混合，再与低聚糖混合，使活菌数达到1×1010CFU/g，再按照100g/袋进行真空包装。
[0053]经检测，本发明制备得到的微生态制剂中嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌的总菌数≥9.9×109CFU/g，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌的总菌数≥108CFU/g。[0054]以下对本发明实施例提供的微生态制剂进行动物喂养检测，结果如下。[0055]1、饲喂微生态制剂对爱拔益加肉鸡(AA白羽肉鸡)生长的影响。[0056]1.1、试验材料。
[0057]微生态制剂按照实施例1中方法制备得到。[0058]1.2、试验方法及结果。
[0059]选择10000只AA肉鸡随机分成2组(公母比例相同)，分别是对照组和微生态制剂组，2组日粮相同，饮水方法：1000只鸡每日用量为10g，将微生态制剂干燥粉剂加入葡萄糖盐水(糖1％、盐0.3％)中稍微搅拌均匀后加入饮水容器中供鸡饮用(加水量在2小时内饮用
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完)，前4周每天饮水一次，4～7周后每隔1天饮用一次，直至出栏。每天注意观察鸡生长情况。结果如下表1所示。
[0060]表1AA白羽肉鸡饲喂微生态制剂的效果
[0061]
从表1可以看出，使用本发明实施例提供的微生态制剂可以每5000羽白羽肉鸡节
省饲料276斤，成活率提高4.6％，出栏平均体重增加0.09kg，而且栏舍中气味得到明显改善。
[0063]2、麻鸡饲喂微生态制剂的效果。[0064]2.1、试验材料。
[0065]微生态制剂按照实施例2中方法制备得到。[0066]2.2、试验方法及结果。
[0067]选择2000只麻鸡随机分成2组(公母比例相同)，分别是对照组和微生态制剂组，2组日粮成相同，饮水方法：1000只鸡每日用量10g，将微生态制剂干燥粉剂加入葡萄糖盐水(糖1％、盐0.3％)中稍微搅拌均匀后加入饮水容器中供鸡饮用(加水量在2小时内饮用完)，前30d每天饮水一次，30～90d周后每隔1天饮用一次，直至出栏。每天注意观察鸡生长情况。结果如下表2所示。
[0068]表2麻鸡饲喂微生态制剂的效果
[0069]
[0062]
[0070]
从表2可以看出，使用本发明实施例提供的微生态制剂可以每1000羽麻鸡节省饲
料95.2kg，成活率提高0.9％，出栏平均体重增加0.1kg。[0071]3、饲喂微生态制剂对哺乳仔猪生长的影响。[0072]3.1、试验材料。
[0073]微生态制剂按照实施例1中方法制备得到。
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3.2、试验方法及结果。
[0075]选择26窝出生间隔不超过2天的杜长大哺乳仔猪进行试验，随机分成两组，每组26窝，分别是对照组与微生态制剂组。饲喂方法：出生的前3d，每天一次，直接灌喂0.5g，4～10d将微生态制剂干粉撒在小托盘上，供小猪自由舔食，11～28d将干粉与教槽料混合饲喂，全过程供给剂量不变。分别在试验的开始与结束进行称重，并记录哺乳仔猪的采食量、生长状况、粪便情况。
[0076]表3哺乳仔猪饲喂微生态制剂的效果
[0077]
从表3可以看出，试验组与对照组相比，腹泻率降低3.80％，死亡率降低3.32％。
[0079]4、饲喂微生态制剂对保育猪生长性能的影响。[0080]4.1、试验材料。
[0081]微生态制剂按照实施例2中方法制备得到。[0082]4.2、试验方法及结果。
[0083]选择84头35日龄杜长大保育猪，随机分成三组，分别是对照组、抗生素组(金霉素100g/t、磺胺100g/t)、微生态制剂组(微生态制剂干粉400g/t)，每组28头，试验28d，分别在试验的开始与结束进行称重，并记录好猪的采食量、生长状况、粪便情况。[0084]表4保育猪喂微生态制剂的效果
[0078][0085]
从表4可以看出，微生态制剂组与对照组相比，腹泻率降低5.07％，日增重增加
25g，料肉比降低0.1，微生态制剂组与抗生素组相比下，效果比较接近，而且微生态制剂组猪舍臭味明显降低，饲养环境得到良好改善。[0087]综上所述，本发明提供了一种能够有效地治疗及预防动物肠道疾病、调节动物肠道微生态平衡、增强动物免疫力和抗应激能力的微生态制剂，本发明的微生态制剂可以通
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过添加到饲料中或饮水进行饲喂，从而达到治疗和预防畜禽消化道疾病，提高动物机体免疫力和抗应激能力，促进动物生长发育，减少抗生素的使用，提高动物的成活率。本发明实施例提供的微生态制剂的制备方法工艺简单，操作方便，成本低廉，适合大规模生产使用。[0088]以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
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