双缩脲双波长自动分析法测定脑脊液总蛋白含量的临床应用

文章编号:1001-5949(2001)10-0584-02

・论　著・

双缩脲双波长自动分析法测定脑脊液

总蛋白含量的临床应用

刘　彤1,刘志浩2

　　【摘要】　目的　在全自动分析仪上建立一种快速简便的脑脊液蛋白双缩脲测定法。方法　在日产7170A全

自动分析仪上,用双缩脲法测定脑脊液蛋白含量。结果　双缩脲法测定脑脊液蛋白准确度高,精密度好,与磺基水杨酸比浊法有很好的相关性,而且重现性优于比浊法,两法相比,P<0.01,有较显著的差异。结论　在全自动分析仪上用双缩脲法测定脑脊液蛋白是一种简使、快速、可靠的方法。

【关键词】　缩二脲反应;脑脊髓液蛋白质类;自动分析【中图分类号】　R446.14　　【文献标识码】　A

Dual-wavelengthautomaticanalysisofcerebrospinalfluidproteinwithbiuretmethodLIUTong.(BeijingChina-JapanFriendshipHosp.,Beijing100029,China)

【Abstract】　Objective　Toestablishakindofrapidandsimplebiuretmethodformeasuringcerebrospinalfluidproteinofauto2maticanalyser.Method　TousebiuretmethodformeasuringcerebrospinalfluidproteinofHITACHI71701Aautomaticanalyzer.Results　Thismethodhasgoodaccruacyandprecision.Therelativitybetweenthismethodandsulfosalicylicacidturbidimetryisverygood.Thereproducibilityofthismethodisbetterthanturbidimetry(P<0.01).Conclusion　Tomeasurecerebrospinalfluidproteinwithbiuretmethodonautomaticanalyserisakindofsimple,rapidandreliablemethod.

【Keywords】　Biuretreaction;Cerebrospinalfluidproteins;Autoanalysis

　　双缩脲试剂与各种血清蛋白多肽链产生的紫色非常一致(即几种主要血清蛋白显色后吸光度值相似,且具有稳定的吸光系数),是目前公认的最可靠的总蛋白浓度测定方法之一,多年来广泛用于临床标本分析。但双缩脲反应在脑脊液总蛋白参考浓度范围内(15～45mg/dl)显色很浅,受仪器灵敏度限制,极少用于脑脊液标本测定。我们用日立7170A全自动生化分析仪,通过增加标本容量以增加显色深度,并利用其双波长和多点定标性能,用双缩脲法测定脊液中总蛋白的浓度,取得预期效果,现报告如下。1　材料和方法1.1　仪器:日立7170A全自动生化分析仪。1.2　试剂:中生公司总蛋白试剂盒。

1.3　标准参考物:BM公司定标血清cfas,批号19165401,蛋白含量51.7g/L,将此浓度分别稀释成29.4mg/dl、58.8mg/dl、117.5mg/dl、235mg/dl、470mg/dl,为全点校正工作标准液。1.4　7170A上机测定参数:测定方法:终点法;测定点:10～34点;波长:540/700nm(主波长/副波长);样

μμμμ品量:30l(减量10l,增量35l);试剂量:240l;稀

　作者单位:1.北京中日友好医院,北京1000292.北京地坛医院,北京100029

释液:蒸馏水。1.5　多点定标浓度:定标点分别为1、2、3、4、5、6,其相应浓度为0、29.4mg/dl、50.0mg/dl、117.5mg/dl、235mg/dl、470mg/dl。2　结果2.1　以29.4mg/dl、235mg/dl两种浓度的定标液分别测定20次,结果为x󰁦1=29.5mg/dl,s1=0.81mg/dl,CV1=2.74%;x󰁦2=234.2,s2=6.68mg/dl,CV2=2.93%,结果表明,不同浓度的定标液用此法测定,其分析精度均可接受。2.2　在3份已知浓度的标本中分别加入50mg/dl和150mg/dl两种标准液,测得回收值在97.1%～100%,平均回收率98.4%。2.3　与磺基水杨酸比浊法的重现性比较:同一份标本,用双缩脲法测定脑脊液蛋白,x󰁦=252.4mg/dl,s=7.41mg/dl,CV=2.93%,同时用磺基水杨酸法测定,󰁦=251.5mg/dl,s=10.5mg/dl,CV=4.17%两者相x

比,P<0.01,有显著性差异。2.4　双缩脲法与磺基水杨酸比浊法的相关性:共测定33份标本,分别用两法进行测定,相关系数r=0.991,回归方程Y=0.974X+2.41,Y表示双缩脲法,X表示比浊法,查表r0.01(31)=0.403,r=0.991>

宁夏医学杂志2001年10月第23卷第10期　NingxiaMedJ,Oct.2001,Vol23,No.10・585・

r0.01(31),故P<0.01,有显著的意义。3　讨论

目前,脑脊液中总蛋白的常规测定方法有很多种,但大多数为手工或半自动分析,影响因素较多,在染料结合法和显色法中,染料浓度、试管清洁度、pH值、表面活性剂、试剂浓度、显色时间及显色后的稳定性等多种因素都会对试剂结果产生影响,而且线性范围较小,高值需手工稀释后测定,比较麻烦[1,2]。磺基水杨酸比浊法也受到试剂稳定性、反应时间及加样量等多种因素的影响。应用双缩脲法进行自动分析避免了上述因素的影响。首先,7170A为全自动分析

参考文献仪,灵敏度、分辨率较高,仪器可以根据需要设置相应4　

[1]　金有余,等.邻苯三酚红钼络合显色法做脑脊液蛋白定量的

参数,不仅可以常规测定,而且能应用于急查标本,标

研究[J].中华医学检验杂志,1988,11(27):103

本可于急诊位随时插入测定。所用定物为BM公司[2]　蒋仁礼,等.脑脊液和尿液蛋白质定量丽春红S染料测定法产品,定标结果非常可靠,线性范围大,附图显示检测[J].临床检验杂志,1985,3(1):23

(收稿:2001-02-21)　责编:马兴忠范围下限达到脑脊液总蛋白浓度参考范围,且线性极

好,从而使双缩脲法适用于脑脊液总蛋白的常规测

定。高值标本不需手工稀释,可直接上机选择减量测定即可。用双缩脲法在7170A分析仪上测定,无须单独配制试剂,试剂非常稳定,只要每日做一点(试剂空白)校正,每周做一次两点校正,即可保证结果的准确性。双缩脲法测定脑脊液总蛋白,高低值的分析精度均在可接受范围内,与磺基水杨酸比浊法有很好的相关性,而且重现性明显优于磺基水杨酸比浊法。

本文通过实验证实,将双缩脲法扩展用于脑脊液总蛋白的测定简便实用,较为理想。

甲氨喋呤、阿糖胞苷鞘内注射引起截瘫2例

陈　燕

　　我院近十年来收治急性淋巴细胞性白血病22例,行鞘内

注射20例,2例发生截瘫,现报道如下。

出现尿潴留、两下肢截瘫、胸10以下感觉减退。给予甘露醇、维生素B12、地塞米松等治疗,未恢复,因同时急淋第3次复发,家属放弃治疗。

1　临床资料

例1,男,25岁,因反复发热、咽痛、全身皮肤出血点2周入院,入院后一疗程VDLP方案即达缓解。缓解后行鞘内注射预防脑膜白血病共7次,鞘内注射物为:MTX10mg/(mm2・次),Ara-C30mg/(mm2・次),地塞米松5mg/次。后自动出院。因“口角左偏、舌麻、恶心”再次入院,骨髓象示缓解,腰穿提示压力偏高(9号针124滴/分),脑脊液细胞数2580/mm3,蛋白定量320mg/dl,涂片找到白血病细胞,确诊脑白,同时予化疗及隔日鞘内注射,第8次后脑脊液压力、蛋白定量、细胞数均正常,但出现进行性下肢无力、尿潴留、胸10以下感觉减退,两下肢肌力Ⅱ󰂼,膝反射消失。给予甘露醇、维生素B12、地塞米松等治疗,未恢复,两月后死于感染。

例2,男,13岁,全身皮肤出血点1天,头昏、神志不清半天入院,即行骨髓学检查示急淋,脑脊液检查示脑膜白血病,DVP一疗程达缓解,鞘内注射7次后脑白缓解,以后又行鞘内注射11次。于一年后又出现头胀、排尿不畅、双足针刺麻木感,腰穿提示脑白,隔日鞘内注射8次后脑脊液恢复正常,但

　作者单位:上海市崇明中心医院,上海202150

2　讨论

目前临床上使上使用的多数抗白血病药物,不能通过血

脑屏障,中枢神经系统血病常为髓外复发的根源。因此鞘内注射已成为急淋的常规辅助治疗和手段。临床常见药物是甲氨喋呤(MTX)和阿糖胞苷(Ara-C)。鞘内注射药物可引起急性、亚急性、延缓性神经毒性,该素性可发生在用药后数周、数月乃至数年,表现为脑或脊髓的运动障碍、对智力的影响。本文2例在鞘内注射15次、26次后发生截瘫,推测由于药物抑制了正常神经细胞DNA合成导致脊髓变性坏死而出现截瘫。因此建议对鞘内注射患者应监测脑脊液MTX、Ara-C、叶酸的浓度以确定是否停药或加用四氢叶酸钙解救。其次,脑膜白血病可累及蛛网膜、脑实质、脊髓、硬膜,可呈慢性发展过程。该2例均发生在脑膜白血病治疗、脑脊液恢复正常后,推测由于早期出现脊髓损害时,往往把所有表现均归咎于白血管细胞浸润,而忽略了脊髓损害出现于用药之前。因此建设对发生脑膜白血病的患者,有条件可做腔、脊髓核磁共振以观察脑、脊髓有无浸润灶。

(收稿:2001-04-19)　责编:姚青