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HPLC 法同时测定复方三黄酊中黄芩苷及盐酸小檗碱的含量

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・1 2・ 滨州医学院学报2014年2月第37卷第1期BMU Journal,Feb.2014,Vo1.37,No. HPLC法同时测定复方三黄酊中黄芩苷及 盐酸小檗碱的含量 丁长玲 崔俊凤。 赵永德 高 华 丁召兴 成文娜。 l青岛大学青岛266021;2滨州医学院附属医院药学部;3滨州市药品检验所 【摘要l 目的 建立测定复方三黄酊中2组分含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱:Thermo,ODS一2HYPERSI[ ,Dim(111111) 250 X4.6 流动相:甲醇一乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH为3.0)(15:15:70);流速:1.0ml/min;检测器:DAD 检测器;检测波长:280nm和345nm;柱温:25℃。结果 黄芩苷在0.06862 ug~0.6862 ug之间进样量与峰面积积分值呈良好 的线性关系,平均加样回收率为99.42%,RSD=0.4%(n=6);盐酸小檗碱在0.0198~0.198 ug之间进样量与峰面积积分值 呈良好的线性关系,平均加样回收率100.6%,RSD=1.9%(n=6) 结论本法简单易行。可用于复方三黄酊的含量测定. 【关键词】 高效液相色谱法;复方三黄酊;黄芩苷;盐酸小檗碱 【中图分类号】 R286 【文献标志码】 A【文章编号】 1001—9510(2014)01-0012-04 Simultaneous determination the contents of Baicalin and Berberine Hydrochloride in compound Sanhuang Tincture by HPLC DING Changling ’ CUI Junfeng ZHAO Yongde GAO Hua D1NG Zhaoxing CHENG Wenna I Qingdao University,Qingdao,266021;2 Department of pham]acy,The Afilfiated Hospital Of Binzhoa Medical University: 3 Binzhou Institute for Drug Control of Shandong Province 【Abstract】 Objective To establish the method for determination of the Baicalin and berberine Hydrochloride in Compound San— huang Fincture by HPLC.Methods HPLC chromat ographie condition:Thermo,ODS-2HYPERSIL,Dim(Film)250×4.6.The mobile phase consisted of methanol—aeetonitrile一0.025 tool/L phosphoric aeid solution(adjusted with triethylamine to pH 3.0)(1 5:1 5: 70)al a flow rate of 1.0 ml・min .The DAD detection wavelength was 280nm and 235 nm.The column temperature was 25 .Re. suits The Baicalin was in good linearity over the range of 0.06862~0.6862 ug.The average recovery was 9942%,with RSD of .0.4%(n=6).The herberine hydroehloride was in good linearity over the range of 0.0198~0.198 ug.The average recove ̄was 100.6%,with RSD of 1.9%(n=6).Conclusion This method is accurate。simple and can be used for the determinatic【】of C0IIl— pound Sanhuang Chlt)ramphenico1. 【Key words】HPLC,Compound Sanhuang Tincture,Baicalin,Berberine Hydrochloride 复方 黄酊是我院研制的一种治疗褥疮和外科 创伤感染的特色药物,有清热、解毒、抗菌消炎,消 制剂的质量,从而保证了患者用药安全、有效。 1仪器与试药 肿、祛腐生肌、清凉止痛作用,对创面愈合具有很好 的临床疗效。该药物直接持续地作用于患部,以透 皮给药的方式迅速渗透,可快速发挥其抗菌消炎、止 痛消肿、祛腐生肌功效并及时缓解分泌物对组织的 Agilent Technologies一1 260高效液相色谱仪,Agi— lent Technologies G1315D DADVI 检测器,甲醇为色 谱纯(禹王集团),黄芩莆对照品(购自巾围药品生 物制品检定所,供含量测定 ,批号1 10715-2010l6, 含量以94.0%计)。乙腈为色谱纯(默克公司),盐 酸小檗碱对照品(购自中国药品生物制品检定所, 损害,使患部组织有体液连续性更新的条件。该制 剂的质量标准巾没有对各组分主要成分黄芩苷、盐 酸小檗碱进行含量测定。为完善该品种质量标准, 保证检验质量,本试验参考有关黄芩苷 、盐酸小 檗碱 的测定方法,对其质量标准进行了研究,采 片{了高效液相法对该制剂主要成分同时测定含量的 方法进行了探讨,取得了满意的效果。切实保证了 供含量测定用,批号1 10713-20091 l含量以86.8% 计)。 2溶液的制备 2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对 照品7.3l mg(含量以94.0%计)和盐酸小檗碱对照 琏金项臼:滨州医学院科研汁划项目(BY2011020) 通讯作者:高华,E-mail:gaohua63@126.COIll 医堂瞳堂拯 Q 尘 2月第37卷第1期BMU Journal,Feb.2014,Vo1.37.No.1 ・13・ 品22.81 mg(含量以86.8%计),分别置100 ml容 4、6、8、10 l注入液相色谱仪,分别测定峰面积积分 值。以对照品的进样量为横坐标,峰面积积分值为 纵坐标,进行线性回归,黄芩苷回归方程为Y= 3652.55866 X-2.06597,相关系数r =1。结果见表 1及图3。盐酸小檗碱回归方程为y=10487.18694 x-9.51589,相关系数r =0.99994。结果见表1及 图4 表1 黄芩苷和盐酸小檗碱线性关系考察结果 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照 品溶液①,精密量取10 ml,置100 ml容量瓶中,加 甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,作为对照品溶液②。 (对照品溶液浓度为:0.06862 mg/ml和0.0198 mg/ m1)。 2.2 供试品溶液的制备精密量取本品2 ml,置 50 ml容量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过, 取续滤液,即得。 3色谱条件 色谱柱:TheFII10,ODS_2HYPERSIL,Dim(mH1) 250×4.6;流动相:甲醇.乙腈_I).025 mol/L磷酸溶 液(用三乙胺调节pH为3.0)(15:15:70);流速: 1.0 ml/min;检测器:DAD检测器;检测波长:280 nm 和345 II1TI;柱温:25℃;进样量:10 Ixl。在此色谱条 件下,制剂中其它成分不干扰复方三黄酊中2个成 分黄芩苷、盐酸小檗碱的测定,见图1、2。 图1对照品溶液HPLC图谱 图2供试品溶液HPLC图谱 4线性关系的考察 分别精密吸取2.1项下混合对照品溶液②1、2、 图3黄芩苷标准曲线 图4盐酸小檗碱标准曲线 5仪器精密度试验 精密吸取混合对照品溶液②5 l,注入液相色 ・l4・ 医学院学报2014年2月第37卷第l期BMU Journa1Feb.2014,Vt,1.37.Nt,.1 .谱仪,连续进样6次,按上述测定方法进行测定,计 算RSD。结果 表2。 表2仪器精密度试验结果 编号一 RSD 试验结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良 好,能够满足测定需要。 7重复性试验 取本品(生产单位:滨州医学院附属医院;批 号:20120508),按照供试品溶液的制备方法,平行制 萤芩苷 盐酸小檗碱 备6份样品,按上述方法和条件进行测定,计算每份 的含量。结果见表4 表4 重现性实验结果 试验结果显示仪器精密度良好。 6稳定性试验 精密吸取对照品溶液②5 l,注入液相色谱 仪,每隔一段时间进样一次,测定黄芩苷和盐酸小 檗碱的峰面积积分值,共考察12 h,计算RSD,以观 察样品溶液在检测过程巾待测成分的稳定性。结 果 表3,、 表3稳定性试验结果 注:A为黄芩苷,B为盐酸小檗碱 试验结果表明测定方法的重复性良好 8加样回收率试验 取已测知含量的样品(生产单位:滨州医学院 附属医院;批号:20120508黄芩苷含量0.351 mg/ ml,盐酸小檗碱含量0.452 mg/m1)精密量取2 ml, 置50 ml容量瓶中,精密加入对照品黄芩_仟(0.I1 l arg/m1)5.O0 ml,盐酸小檗碱(0.1980 mg/m1)1 ml, 按上述色谱条件测定方法操作,测定结果 表5 表5加样回收率试验结果 表6含量测定结果 试验结果表明测定方法的叫收率良好 9样品测定 按上述测定方法和条件,对已牛产的6批样品 进行了测定,测定结果见表6 根据6批样品测定结果,含黄芩以黄芩苷计 得少于0.30 rag/ml,含黄连和黄柏以盐酸小檗碱计 不得少于0.40 mg/ml。 (下转第l8页) ・l 8・ 滨州医学院学报2 014年2月第37卷第1期BMU Journal, h.2014,Vol 37,No. 衍生, 长 子(PDGF)、转化生长冈子一p(TGF—p)、 Ifl1‘管1人J皮,} 长l大1子(VEGF)以及胰岛素样生长冈子 骨组织的修复,故实验中A组较B、c、D组的成骨作 州更加明 。 (IGF)等,它们与纤维蛋h结合,并随纤维蛋白降解 缓慢释放,延长r作川时间,加强r成骨效果。这些 综上所述,PRF叮以有效的促进拔牙窝的组织 愈合修复,能够保存牙槽嵴,PRF联合llano—HA具 有保存拔牙窝牙槽嵴高度的功能,可作为牙槽骨保 存的移植材料。 参考文献 [I戴勇中,叶平.富血小板纤维蛋h的研究进展[Jl rf1 I I腔 学杂志,2011,46(6):382-384. 生Kl大1子与细胞增殖有关,特别是与创伤与骨再生 l卡H天、。 ,能调控细胞的分化与凋亡,在决定PRF的 牛物性能方面起到重要的作,【_}j。它们相互促进,相 影响,构成r一个功能强大的组织修复调节网络 系统 本实验巾,通过对各组在4、12周的组织 病理学观察,发现添加了PRF的拔牙窝在不同时期 成骨的质量和数量均优于未添加PR}、的拔牙窝。 L2 李琦 周延民,翟静捷,等富血小板纤维蛋白修复兔颅骨骨缺损 的实验研究[J]L]腔医学研究,201 1,27(7):587—589.  13 张勇,李昀生.应用牙槽窝保存技术减少拔才后骨吸收的研究进 拔牙窝骨愈合修复的早期(4周),PRF具有明显 展[J].国际【__I腔医学杂志,201l,38(3):288-291.  I4j I1()W, Fawil B.Dunn JC,et a1.The hehavior of human nits( I1{hymal slcnl cells in 3D fibrin clots:dependence Oil fibrinogen(・I)lice!lt|'alion 的效果 住后期(12周),B组骨组织的修复效果与 C组市兀比并 明显,原r大】考虑为纤维蛋白在人体内 降解速度较快,PRF的生物学特性随着时间的延长 逐渐消l,人,I大1此后期的成骨作崩也逐渐减弱。PRF and clot StlXl{:tare[J I Tissue Engineering,2006,l 2(6):1587— 1595. 1 5 J Kazuhi r{}(),Tomoyuki K,Manabu M.et n1.Platclet—Iich plasma co1)一 tains high levels of platelet—derived gr{}wlh (-t( |'amt t ransfbrmillg growth factor—B and mI}dulates the Im ̄lif{ ralinn nf petiodon|al1)r 一 炎痱渊节 嘶具有良好重要的作用。PRF包含r 液【{1儿 所有的白细胞,fj细胞所分泌的大量的 细胞IXI子有白细胞介素1.B(IL一1B)、白细胞介素_4 (I1 -4)、F1细胞介素6(II .6)、肿瘤坏死网子(TNF— t )、VEGF 等。这些} {细胞因子具有限制炎症扩 ed tells in vitro[J J.Journal Ilf P)niodontology.2003,74(6):849— 857. 【6 j Kawase T,Okuda K,Wolf f F,el a1.Platelel-rich plasma一( ivcd ibrfin{:lot fommtkm stimulates collagen synthesis in pcriodotda{liga— merit and osteoblastic cells in vitrol J].J Periodontol。2003,74(6): 858 864. 散、免疫调节及促进愈合作用。实验证明PRF能够 减少术后的疼痛和水肿,减轻感染的发生,增强抵御 感染的能力 1 7]Assoian RK,Sporn MB. type beta transforming gmwth fal㈤I l I『1『1IJ— Than platelets:release during platelet degranulation and act iot1【)l 1vascular smooth nmscle),'ellsf J].Jc】uIhal ot Cell Bioh}gy,1986,102 (4):1217一I223 tlal3tt—HA具有良好的成骨能力、生物相容性、可 (8]Landesberg R,Roy M,Glickman t/S Quantitication of grow{h{aclⅢ levels using a simpliied metfhod ot pIatelel—rich plasma gel Incpa— 降解悱及骨传导作用,但骨诱导的作用欠佳,单独移 植后成,目 效果_』}不理想,成骨效果(尤其在早期)要 弱于PRF .PRF具有骨诱导作用,能够诱导未分化 的『HJ充质细胞分化为成骨细胞。PRF与nano—HA 复合 既发挥_r llano—HA的骨引导性,又发挥了 ration[J J.J Oral Maxillofac Surg,2000,58(3):297—300. 19]Dohan DM,Ch{mkroun J,Diss A,et al Platclct—rich I'ib ̄in(I,RI ̄、):a second—generation platelet CO[ICCIIIrail!Pml IIJ:leucoc3tc aI。Iira{ion: a flew feature for Illatelet concentra s'? I]Oral Surg Oral Me{t(}ral Pathol Oral Radiol Endod,2006,101(3):c51一e55. PRF的骨诱导性,使二者发生协同作用,促进拔牙窝 (收稿日期:2()13.11一l8) (上接第14页) 品进样相应组分的含量,回收率也较理想,呵作为复 l0讨论 方j黄酊产品质量控制指标。③本文建立高效液相 色谱测定法,方法简便、灵敏,分离效果好、结果准 确,能有效地控制药品质量。 参考文 献 l 张先平, 桃荣.商救液牛}J色活法测定肤 合刹t”Ot ¨‘的 [J]. f1圉医院药学杂志,2008,28(22):I967—1968. 提取 式的选择:根据黄芩苷、盐酸小檗碱及 其他成分的理化性质,住高效液相色谱法测定中,加 入甲醇提取完全,分离度好,广大1此采用此提取方法。 ②流动相的选择:分别以甲醇一乙腈-().025 mol/L磷 酸溶液(H】 乙胺渊节pH为3.0)(15:15:70)为流 动相,本法精密度高,稳定性和重复性好,黄芩苷、盐 酸小檗碱在进样浓度范围内呈良好线性,涵盖了样 2 J赵建波,吴玲,张华芸,等消绵安颗粒的质挝抓准研究 IJ1f】 .圄医院药学杂志,2008,28(24):2I 34—2I36. 3 中国药典.一部[sj.2010:附录IX M 54 (收编lt期:20I3—12-12) 

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