CAT. NO. 11668019 Size: 1.5 ml 4℃储存（不要冻存） 说明：
LipofectaminTM 2000是核酸（DNA或RNA）转染真核细胞的一个专用的试剂盒，其有如下优点：
对各种细胞及细胞板（如96孔板）都有高的转染效率，在www.invitrogen.com 的细胞系数据库中有各种细胞转染成功的实例。
在含有或是不含有血清的培养基中，DNALipofectaminTM 2000复合物能够直接加给细胞。
在转染之后不需要除去复合物以及添加或是更换培养液，但在培养46小时后需要除去复合物。
关于转染的一些重要建议：
1.
不要用即将要介绍的转染程序进行RNAi的转染实验。在www.invitrogen.com/rnai上有转染步调，登陆后点击说明。
2.
对于大多数细胞系，转染复合物中DNA(μg)与LipofectamineTM 2000(μl)的比例在1：2到1：3之间，最好达到最优化的比例。注意：在混合之前，我们建议用OptiMEM I 低血清培养基（Cat: NO.31985062）（reduced
serum medium）稀释LipofectamineTM 2000和DNA.
3.
为了实现高的转染效率、高的目的基因表达水平以及低水平细胞毒效应，受体细胞最好达到高的浓度：在转染时，细胞的培养液的混浊度建议为90%95%并最优化混浊度。此外，在实验过程中包管相同的接种条件。
4. 5.
为防止细胞死亡，在培养基中不要加抗生素。
由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VPSFM）会抑制阳离子脂质体介导的转染，因此有需要检测一下无血清培养基和LipofectamineTM 2000的相容性。
转染步调（用于DNA）：
依照如下步调在24孔板中转染哺乳动物细胞。对于其它种类细胞板请参照转染量度尺度。步调中均依照一个细胞孔的量给出质量和体积。
1.
贴壁细胞：转染的前一天，在500μl无抗生素培养基中接种0.52×105个细胞，以包管在转染时候细胞的混浊度达到90%95%。
悬浮细胞：在准备转染混合物时，每500μl无抗生素培养基中含有细胞数量为48×105。
2.
对于每个转染样品，按下面的方法准备：
a、 在
50μl无血清OptiMEM I 低血清培养基中（或是其它无
血清培养基）稀释DNA，并轻轻混匀。
b、 使用前轻轻混匀
LipofectamineTM 2000，然后取相应的量
稀释在OptiMEM培养基中。室温下静置5分钟。注意：要在30分钟内混合LipofectamineTM 2000和DNA的稀释液。
c、 室温下静置
5分钟后，混合LipofectamineTM 2000和DNA
的稀释液（总体积为100μl）。轻轻混匀并在室温下静置20分钟（溶液混合后可能会看上去浑浊）。注意：混合物在室温下的6个小时内不会失效。
3.
细胞板的每个孔中加混合液100μl，并前后轻轻摇动细胞板使混合液与孔中的培养液混匀。
4.
检测目的基因的表达情况前，细胞于37℃ CO2培养箱中培养1848小时。此时不需要改变培养基，但46小时后也许需要更换.
5.
对于固定的细胞系：转染24小时后将细胞以1：10（或更高的稀释度）稀释度转移到新鲜的生长培养基中。如果需要的话，在以后的培养中可以在培养基中加入选择培养基。
对于悬浮的细胞系：转染4小时后，如果需要，加入PMA和/或PHA以提高CVM启动子的活性并促进基因表达。
转染量度尺度：
在分歧的组织培养板中转染细胞时，根据相对的概况积，按比例加入LipofectamineTM 2000、细胞、和培养基，具体情况剪下表。在自动、高产率体系中，建议96孔板的转染混合物的体积为50μl。注意:操纵时，可以直接将细胞混入转染混合物中进行
快速的96孔板转染。在细胞板中准备好转染混合物，然后直接加入说明中正常100μl体积时浓度的2倍浓度细胞培养液。在转染混合液存在情况下，细胞可以正常的贴壁。
培养容器 每个孔的概相对于24孔况积（cm2） 板的概况积 2 4 10 10 20 60 1 2 5 5 10 30 铺板培养基体积 100μl 500μl 1ml 2ml 2ml 5ml 15ml DNA(μg)/培养基（μl） LipofectamineTM 2000（μl）/培养基（μl） 10μl/250μl 10μl/250μl 96孔板 24孔板 12孔板 35mm板 6孔板 60 mm板 10cm板 注意：概况积是根据培养容器的实际丈量得到，但也会根据容器生产商的分歧发生变更。 优化转染：
为了得到高的转染效率和低的无用副效应，通过改变细胞浓度、DNA以及LipofectamineTM 2000的浓度来优化转染条件。另外，要包管细胞培养基的细胞混浊度高于90%，DNA(μg)与LipofectamineTM（μl ）2000的比例在1：0.5到1：5之间。
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